Leithlisiú faoi Threoir faoi Chomhdhéanamh Feanólacha ó Bhalla Anneslea Fragrans. Agus a dTionchar Cytoprotective i gCoinne Strus Ocsaídeach a Spreagtar le Sárocsaíd Hidrigine i gCealla HepG2 Cuid 1

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Coimriú: Anneslea fragrans Wall., commonly known as"Pangpo Tea", is traditionally used as folk medicine and healthy tea for the treatment of liver and intestine diseases. The aim of this study was to purify the antioxidative and cytoprotective polyphenols from A.fragrans leaves. After fractionation with polar and nonpolar organic solvents, the fractions of aqueous ethanol extract were evaluated for their total phenolic (TPC) and flavonoid contents(TFC) and antioxidant activities(DPPH, ABTS, and FRAPassays). The n-butanol fraction (BF)showed the highest TPC and TFC with the strongest antioxidant activity. The bio-guided chromatography of BF led to the purification of six flavonoids (1-6) and one benzoquinone lanthanoid (7). The structures of these compounds were determined by NMR and MS techniques. Compound 6 had the strongest antioxidant capacity, which was followed by 5 and 2. The protective effect of the isolated compounds on hydrogen peroxide (H2O2)-induced oxidative stress in HepG2 cells revealed that the compounds 5 and 6exhibited better protective effects by inhibiting ROS productions, having no significant difference with vitamin C(p>0.05), ach léirigh 6 an ghníomhaíocht frith-apoptóis is fearr. Tugann na torthaí le fios go bhféadfadh A.fragrans fónamh mar fhoinse luachmhar fhíteiceimiceach frithocsaídeach chun bia feidhmiúil agus táirgí nútraiceodacha sláinte a fhorbairt.

Eochairfhocail:Anneslea fragrans; frithocsaídeach; leithlisiú treoraithe; strus ocsaídiúcháin; gliocóisídí flavonoid

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

1. Réamhrá

Déantar speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS) a tháirgeadh mar sheachtháirgí trí riospráid ocsaídiúcháin i ngnáthphróisis fiseolaíocha agus bithcheimiceacha [1]. Mar fréamhacha saor in aisce ingenous, tá ról tábhachtach ag ROS maidir le comharthaíocht cille agus seasmhacht an chomhlachta a chothabháil i raon gnáth [2]. Mura bhféadfaí an ROS a scavened go héifeachtach, d'fhéadfadh strus ocsaídiúcháin a bheith mar thoradh ar ROS iomarcach, rud a d'fhéadfadh tionchar a imirt ar iomadú cille agus apoptosis [3]. Tá dlúthbhaint ag strus ocsaídiúcháin le galair éagsúla lena n-áirítear diaibéiteas, hyperlipemia, otracht, ailse, agus galair cardashoithíoch agus neurodegenerative [4]. Le déanaí, tá fianaise ag go leor staidéir go bhfuil sraith éifeachtaí tairbhiúla ag aiste bia atá saibhrithe le frithocsaídeoirí mar gheall ar a gcumas scavening ar ROS iomarcach [5,6].

Tá éagsúlacht móilíní i frithocsaídeoirí nádúrtha mar polyphenols[], carotenoidí [8], vitimíní [9], comhdhúile ina bhfuil nítrigine [10], agus cúmairíní [9]. Déantar polyphenols a dháileadh go forleathan ar fud ríocht na bplandaí agus cuireann siad sochair sláinte chun cinn mar gheall ar a n-airíonna frithocsaídeacha [11]. Tá go leor acu, mar shampla resveratrol agus roinnt díorthaigh [12], anthocyanidins [13, isoflavones [14l, catechin [15l, agus quercetin [16] ar eolas go maith as a n-éifeacht chosanta ag scavenging ROS [1]. Le blianta beaga anuas, tá polyphenols ag tarraingt aird maidir le hailse a chosc[17], dysfunc cardashoithíoch[18], galair néar-mheathlúcháin [19], agus aosú [20]. Dá bhrí sin, tá gá práinneach ag cuardach frithocsaídeoirí éifeachtacha chun sláinte an duine a chur chun cinn.

Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú

Balla Anneslea fragrans. Is planda síorghlas é, a dháiltear go príomha i ndeisceart na Síne [21]. Chomh maith lena chuspóir ornáideach, úsáidtear duilleoga A.fragrans freisin mar leigheas tíre chun fiabhras, cosaint ae, boilg agus intestines bríomhar a chóireáil an tSín agus an Chambóid [22], a taifeadadh i "Yunnan Simao Chinese Herbal Medicine" Ina theannta sin, próiseáladh na duilleoga freisin mar dheoch tae, ar a dtugtar "Pangpo Tae".I dtuarascálacha roimhe seo [23], léirigh sliocht A.fragrans gníomhaíochtaí frithocsaídeacha agus antimalarial. Mar sin féin, go dtí seo, níor tuairiscíodh a chomhdhúile feanólacha frithocsaídeacha ó A. fragrances.

Mar sin, ba é cuspóir an taighde seo ná na comhdhúile frithocsaídeacha ó dhuilleoga A. fragrans atá freagrach as a n-úsáid thraidisiúnta chun galair ae a chóireáil a leithlisiú agus a aithint. Rinneadh measúnú ar na ceithre chodán, codán déchlóraimeatán (DF), codán aicéatáit eitile (EAF), codán n-butanol (BF), agus codán uisce iarmharach (RWF) de eastóscadh eatánóil uiscí le haghaidh a n-ábhar iomlán feanólach (TPC) agus iomlán flavonoid (TFC) agus as a gcumas frithocsaídeach. Bhí an TPC agus an TFC ab airde ag an gcodán n-butanol (BF) leis an ngníomhaíocht frithocsaídeach is láidre. Cheadaigh an codánúchán biththreoraithe de BF íonú na gcomhdhúile. Ina theannta sin, rinneadh éifeacht cíteachosanta na gcomhdhúl scoite ar strus ocsaídiúcháin de bharr sárocsaíd hidrigine (H, O,) i gcealla HepG2 ailse ae daonna. Cinneadh an táirgeadh ROS intracellular agus apoptosis cille ag baint úsáide as cíteiméadracht sreafa. Mar sin, thug an taighde seo comhábhar fíteiceimiceach frithocsaídeach luachmhar d’fhorbairt agus d’úsáid duilleoga A.fragrans mar fhorlíonadh feidhme (tae sláintiúil) sa tionscal bia agus sláinte.

2. Torthaí agus Plé

2.1.Éifeachtúlacht Toradh Codáin agus Fo-chodáin

Is teicnící tábhachtacha iad deighilt leachtach-leachtach ag tuaslagóirí orgánacha agus codánúchán colún chun comhdhúile bithghníomhacha ó eastóscadh amh a shaibhriú [24]. Ag baint úsáide as deighilt leachtach-leachtach, rinneadh sliocht eatánóil (CE) ó dhuilleoga A. fragrans a chodánú i ndiaidh a chéile le déchlóraimeatán, aicéatáit eitile, agus n-butanol chun ceithre chodán a thabhairt (DF, EAF, BF, agus RWF), faoi seach. Fuarthas amach go raibh éagsúlacht ó 11 go 27 faoin gcéad ar chéatadáin toraidh na gcodán . Bhí an toradh ab airde ag an gcodán uisce iarmharach (RWF, 27 faoin gcéad), agus bhí táirgeacht na gcodán eile san ord seo a leanas: codán n-butanol (BF, 24 faoin gcéad ), codán aicéatáit eitile (EAF, 21 faoin gcéad ), déchlóraimeatán codán ( DF , 11 faoin gcéad ) .

Fuarthas amach go raibh céatadán toraidh na bhfochodán (BF-A go E) éagsúil ó 3.82 go 48.4 faoin gcéad. Thug an BF-E an toradh ab airde de 48.4 faoin gcéad agus BF-D (24.96 faoin gcéad ) ina dhiaidh sin, a bhfuil táirgeacht i bhfad níos airde aige ná na codáin eile.

Anailís 2.2.HPLC

Tá sé léirithe gur teicníc chumhachtach í braite crómatagrafaíocht leachta ardfheidhmíochta (HPLC) chun cinneadh cainníochtúil a dhéanamh. Léirigh anailís HPLC go raibh na comhdhúile is mó ag BF leis an ngníomhaíocht frithocsaídeach is láidre. Faoi threoir thástálacha frithocsaídeacha agus anailís HPLC, rinneadh crómatagrafaíocht bhreise ar an gcodán frithocsaídeach chun fochodáin a leithlisiú. Cuireadh an BF faoi cholún D101 roisín hiodráitithe chun cúig fho-chodán a thabhairt (BF-A go E). Léirigh anailís HPLC go raibh na comhdhúile frithocsaídeacha is mó ag BF-Cto E. Cheadaigh codáin bithtreoraithe de na codáin seo (BF-C go E) seacht gcomhdhúil íon a íonú.

Mar a léirítear i bhFíor 1, rinneadh anailís HPLC ar an BF agus ar sheacht gcomhdhúil íona. Bunaithe ar chomparáid leis na hamanna coinneála agus cuair ionsú UV, deimhníodh na seacht gcomhdhúil seo trí amanna coinneála ag 7.51 min (creimneach, 7), 7.92 min ((epi) - catechin, 6), 9.38 min (confusoside, 1),9.57 nóim((S)-náringenin-7-O- -D-glucopyranoside, 4), 10.32 nóim(vaccinii folin, 2), 12.64 nóim (2',3,4,4'-tetrahydroxydi dihydrochalcone, 5). -1-própánón,3)(Fíor 1A). Ina measc, baineann comhdhúile 1-6 le flavonoids, agus baineann comhdhúil 7 le benzoquinolethanoid.

2.3.Ábhar Feanólach Iomlán (TPC) agus Ábhar Iomlán Flavonoid (TFC)

Úsáidtear duilleoga A.fragrans go traidisiúnta mar thae sláinte próiseáilte agus tá sé cruthaithe go bhfuil siad ina acmhainn mhaith feanólacha agus flavonoids [25]. De réir measúnachtaí speictrophotiméadracha, rinneadh tástáil ar an TPC agus TFC i gcodáin agus i bhfochodáin éagsúla ó dhuilleoga A. fragrans. Mar a léirítear i dTábla 1, bhí an luach TPC ab airde ag an BF le 238.12 ±12.05 mg GAE/g sliocht agus EAF ina dhiaidh sin. Léirigh an DF an luach TPC is ísle mar 66.52 ± 0.57 mg sliocht GAE/g. Mar an gcéanna, fuarthas na tiúchain TFC ab airde i BF le TFCvalue de 165.19 ± 5.21mg RE/extract. Maidir leis an RWF agus an EAF (66.92 ± 1.38 agus 116.12 ± 2.89mg GAE/sliocht, faoi seach), bhí tiúchan TFC níos ísle acu freisin ná an sliocht BF(165.19 ±5.21 mg RE/g), agus bhí an tiúchan TFC is ísle ag DF. mar 47.94 ± 2.84 mg sliocht RE/g. Bhí ábhar TPC agus TFCin BF timpeall ceithre huaire níos airde ná iad siúd i DF.

Léirigh na sonraí láithreacht TPC agus TFC is airde i BF-E le luachanna mar 262.03 ± 1.72mg sliocht GAE/g; 180.52 ± 6.30 mg sliocht RE / g, faoi seach, agus sliocht BF-D (219.84 ± 4.01 agus 157.01 ± 2.50 mg RE / g, faoi seach), BF-C (210.69 ± 6.31 agus 151.01 ± 4.33 mg RE / g, faoi seach). faoi ​​seach), cé go raibh na luachanna TPC agus TFC is ísle ag BF-B agus BF-A (Tábla 1).

2.4.Antioxidant Gníomhaíocht

Déantar an chuid is mó de na polyphenols, go háirithe flavonoids agus aigéid feanólacha, a shaothrú i mbianna frithocsaídeacha tóir (nutraceuticals) agus cuireann siad sraith buntáistí daonna i láthair [17]. Inár staidéar roimhe seo, tá na duilleoga A.fragrans cruthaithe mar acmhainn mhaith polyphenols[26]. Mar sin féin, níl imscrúdú déanta fós ar ghníomhaíocht frithocsaídeach an sliocht ó duilleoga A. fragrans agus a phytochemicals. Mar gheall ar mheicníochtaí imoibrithe frithocsaídeacha éagsúla, cuireadh trí thástálacha de ABTS, DPPH, agus FRAP le chéile chun meastóireacht a dhéanamh ar ghníomhaíocht frithocsaídeach na codáin agus na bhfo-chodáin ó duilleoga A. fragrans.

Among the fractions, BF showed the most potent antioxidant activity in ABTS, DPPH, and FRAP radical-scavenging activities with 1808.46±96.52,951.42±87.75, and 1822.96± 29.24 μmol TE/g extract （Table 1）.PDF showed the lowest antioxidative activity in ABTS and FRAP assays（139.23±8.62 μmol TE/g extract and 180.05± 9.46 μmol TE/g extract, respectively)(Table 1). Whereas the radical scavenging activities of four fractions (DF, EAE, BF, and RWF) in the DPPH radical-scavenging assay were found to vary from 613.38± 45.35 to 951.42±87.75 μmol TE/g extract, respectively, having no significant difference (p>0.05). These results suggested that the phytochemicals from A. fragrans leaves might be insensitive to DPPH. To further obtain the active metabolites, BF was selected for further fractionation. The BF was subjected to D101 macroporous adsorbing resin column chromatography eluting by a gradient of the methanol-aqueous system to yield five subfractions(BF-A to E). Hence, the ABTS radical-scavenging activity of these subfractions can be ranked as BF-E> BF-C>BF-D. Léirigh an ghníomhaíocht laghdaitheach sa mheasúnacht FRAP gurb í BF-Dhad an ghníomhaíocht frithocsaídeach is láidre, a lean BF-C agus BF-E. Is fiú a lua gur léirigh trí fho-chodán (BF-C go E) gníomhaíocht frithocsaídeach níos airde ná an codán máthair. (BF). I dteannta a chéile, cuireadh BF-C go E isteach chuig crómatagrafaíocht colún chun na fíteasceimiceacha frithocsaídeacha a aonrú agus a shainaithint.

2.5. Gníomhaíocht Frithocsaídeach na gComhdhúl Scoite

Rinne ABTS, gníomhaíocht scavenging radacach DPPH, agus gníomhaíocht frithocsaídeach FRAP na comhdhúile scoite go léir (comhdhúile 1-7) a mheas maidir le cumas frithocsaídeach. Déantar cur síos ar na sonraí go léir i dTábla 2. Léirigh comhdhúile6 agus 2 an ghníomhaíocht frithocsaídeach is airde, agus ina dhiaidh sin 5. Léirigh cumaisc 4 gníomhaíocht measartha frithocsaídeach agus measadh go raibh comhdhúile 1, 3, agus 7 neamhghníomhach le gníomhaíochtaí scavenging radacach ABTS agus DPPH níos lú ná 200 μmol. Sliocht TE/g. Ag baint úsáide as Vc （na gníomhaíochtaí scavenging radacach le 2932.91 ±93.63 agus 1873.56 ± 121.68 umol TE/g sliocht, faoi seach) mar an rialú dearfach, bhí an ghníomhaíocht frithocsaídeach is láidre ag compound6 i ABTS agus DPPH radacach scavenging thástálacha le 1580.373 ± . 1 . Sliocht TE/g (lch<0.05）, respectively.="" furthermore,="" compound="" 6="" had="" the="" best="" antioxidant="" capacity="" in="" the="" frap="" assay="" as="" 5027.43±620.75="" μmol="" te/extract,="" which="" was="" much="" higher="" than="" that="" of="" vc="" as="" 3291.28±241.02="" μmol="" te/extract.="" moreover,="" the="" compound="" 2and6showed="" a="" significant="" antioxidant="" activity,="" which="" was="" equivalent="" to="" a="" positive="" control="">

Ina theannta sin, pléitear an caidreamh struchtúr-gníomhaíochta frithocsaídeach de na flavonoids (1-6) ag céimeanna éagsúla éifeachtaí coisctheacha. Chuir Comhdhúil 2 níos mó gníomhaíochta frithocsaídeach i láthair ná comhdhúile 1, 3, agus 5, rud a thug le tuiscint go bhféadfadh ról ríthábhachtach a bheith ag na 3,{8}}ghrúpaí déhidrocsa i dé-hidrailcóin in 2 i gcoinne ABTS, gníomhaíocht scavenging radacach DPPH, agus frithocsaídeach FRAP. gníomhaíocht, agus d'fhéadfadh ról tábhachtach a bheith ag an taise glúcóis a ionadaítear ag C-4'in 2 ar a chumas frithocsaídeach [4]. Ina theannta sin, léirigh cumaisc 6 an ghníomhaíocht frithocsaídeach is airde i gcomparáid le comhdhúile eile, rud a thug le tuiscint gur dócha go dtaispeánfadh flavan-3-ols (catechin) gníomhaíocht scavenging radacach níos fearr ná dihydrochalcones agus flavanones [27]. Go hachomair, roghnaíodh comhdhúile 2, 5, agus 6 le gníomhaíocht frithocsaídeach maith a thuilleadh le haghaidh éifeachtaí cytoprotective i gcoinne strus ocsaídiúcháin ag H2O2 sa chéad staidéar eile.

2.6. Gaol idir Gníomhaíocht Frithocsaídeach agus Ábhar TPC/TFC

Bhí comhghaol mór idir comhchruinnithe an TPC agus an TFC le gníomhaíocht fhrithocsaídeach ó luachanna FRAP (r{{0}}.982 agus 0.977) agus ABTS (r=0.959 agus 0.965), faoi seach. Léirigh an maitrís comhghaolaithe comhghaol láidir freisin idir luachanna ABTS agus FRAP (r =0.992). Ina theannta sin, rinneadh anailís ilathraitheach (PCA), a baineadh as sonraí Tábla 1. Mar a léirítear i bhFíor 2, mhínigh PCA 94.44 faoin gcéad den éagsúlacht iomlán, ina raibh PC1 freagrach as 84.73 faoin gcéad den athraitheas agus b’ionann PC2 agus 9.71 faoin gcéad . Cuirtear na measúnachtaí FRAP, ABTS, agus DPPH le EAF agus RWF ag na ceathrúna uachtaracha ar dheis, agus tá comhchruinnithe TPC agus TFC le BF agus BF-Cto E suite ag na ceathrúnáin ar dheis níos ísle sna scóir dearfacha PC1, faoi seach. Idir an dá linn, tá an DF agus BF-A go B le tiúchan íseal TPC agus TFC suite feadh ais scóir diúltacha PC1. Léirigh na torthaí seo go bhfuil dlúthbhaint ag comhchruinnithe TPC agus/nó TFC le cumas frithocsaídeach, agus dá airde an tiúchan TPCor TFC sna codáin agus sna fo-chodáin, dá airde a luachanna acmhainne frithocsaídeoirí. Léirigh na torthaí seo go bhféadfadh an t-ábhar ard feanólach agus flavonoid i gcodáin agus i bhfochodáin éagsúla ó dhuilleoga A. fragrans cur le gníomhaíocht frithocsaídeach.

Fíor 2. Anailís PCA ar iomlán feanólachta, flavonoids, agus gníomhaíocht frithocsaídeach. Léiríonn modhanna le litreacha éagsúla difríochtaí suntasacha (lch<0.05).df, eaf,="" bf,="" rwf="" mean="" dichloromethane="" fraction,="" ethyl="" acetate="" fraction,="" n-butanol="" fraction,="" and="" residual="" water="" fraction.="" bf-a="" to="" e="" means="" bf="" was="" subjected="" to="" d101="" column="" chromatography="" to="" yield="" five="">

Baintear an t-alt seo as Molecules 2021, 26, 3690. https://doi.org/10.3390/molecules26123690 https://www.mdpi.com/journal/molecules