Glacadóir Hidreacarbóin Aryl a Ghníomhachtú Le 6-formylindolo[3,2-b]Carbazole Maolaithe Géarghortú Duán Trí Athlasadh agus Apoptóis a Choisceadh
Mar 20, 2022
Coimriú:Géarmhíochainegortú duáin(AKI) is galar ilfhachtóiriúil de aetiologies éagsúla. Is fachtóir trascríobh ligand-gníomhaithe é gabhdóir hidreacarbóin Aryl (AhR) a fhreagraíonn do ligands chun slonn géine a aslú nó a chosc, rud a rialaíonn speictream éagsúil d’éifeachtaí bitheolaíocha nó pathafiseolaíocha. Mar sin féin, tá éifeacht AhR ar AKI fós anaithnid. Rinneadh instealladh ion-peritoneal amháin de 50 faoin gcéad gliocról chun rhabdomyolysis a spreagadh i lucha C57BL/6J. An déthaobhachduánachBhí occluded pedicles ar feadh 30 nóiméad agus ansin a bhaint a spreagadhduánachGortú I/T. Baineadh úsáid as 6-formylindolo[3,2-b]car-bazole (FICZ), táirge fóta-ocsaídiúcháin de thripteafán a bhfuil ard-chleamhnas aige do AhR. Rinneadh an staidéar in vitro ar chealla HK-2. Díscaoileadh mióglóibin neamhfheiriúil agus FICZ sa mheán i ngrúpaí cealla éagsúla. Laghdaigh cóireáil le agónaí AhR FICZ go mór ardú creatiníne serum agus úiré in AKI. Samhaltú-spreagtha AKIdamáiste duánachbhí maolaithe ag FICZ. Cuirtear AhR in iúl go príomha i gcealla feadánacha proximal agus d'fhéadfaí é a ghníomhachtú le riarachán FICZ. Idir an dá linn, spreag AKI táirgeadh cítocíní pro-athlastacha i ndaoine gortaitheduáin, agus chuir FICZ bac ar a gcuid cainte. Ina theannta sin, d'aisiompaigh FICZ apoptosis cille go héifeachtach i múnlaí AKI. Go meicniúil, spreag AKI gníomhachtú cosáin NF-κB agus JNK saduáin, agus chuir FICZ na habairtí próitéine comhfhreagracha seo faoi chois go suntasach. Don staidéar in vitro, chuir FICZ bac freisin ar athlasadh agus apoptosis i gcealla mióglóibin nó HK-2 spreagtha H/R. Go hachomair, mhaolaigh agonism AhR ag FICZ rhabdomyolysis agus AKI spreagtha I/R. Chuir FICZ bac ar athlasadh agus apoptosis trí chosáin NF-κB agus JNK i gcealla feadánacha cóngaracha a shochtadh.
Eochairfhocail:gortú duáin géarmhíochaine, apoptosis, gabhdóir hidreacarbóin airile, athlasadh, cill epithelial tubular duánach
Feabhsaíonn an CISTANCHE GALAR Duán/Duánach
RÉAMHRÁGéarmhíochainegortú duáin(AKI) tagairt don mheath tapa arfeidhm duánachi gceann cúpla uair an chloig go dtí roinnt laethanta mar gheall arduánachneamhdhóthanacht perfusion, drugaí nephrotocsaineacha nó nimheanna, bac conartha urinary agus cúiseanna eile.1 Áirítear go príomha ar chúiseanna cliniciúla AKI gortú ischemia-reperfusion, substaintí nephrotoxic (cosúil le drugaí, oibreáin ar conradh agus ábhar cille matán scaoileadh ag rhabdomyolysis) agus sepsis. Fulaingíonn thart ar 13.3 milliún duine ó AKI gach bliain ar fud an domhain.2 Cuireann AKI, lena ard-bhásmhaireacht agus costais, ualach trom air.3 Áirítear ar na príomh-mheicníochtaí paiteolaíocha gortúduánachcóras soithíoch,4,5 strus reticulum endoplasmic, 6,7 damáiste mitochondrial, 8 apoptosis, 9 strus ocsaídiúcháin, agus athlasadh.10 Is siondróm é rabdomyolysis (RM) arb iad is sainairíonna é neacróis matán agus scaoileadh ábhar cille matán isteach sa chúrsaíocht, lena linn Is í AKI an achrann is coitianta11; Tá ischemia-reperfusion (I/T) ar cheann de na paiteolaíochtaí is mó de AKI, arb ionann é agus 60 faoin gcéad de na cúiseanna AKI go léir.12 Faoi láthair, níl aon chóireáil éifeachtach do AKI de bharr an dá chúis thuasluaite ach amháin chun deireadh a chur le etiology, tacúil. cóireáil, agusduánachteiripe athsholáthair.
Déantar receptor hidreacarbóin Aryl (AhR) a thrascríobh agus a aistriú ó ghéin AHR. I ndaoine, cuirtear AhR in iúl in orgáin éagsúla, lena n-áirítear an scamhóg, thymus,duán,ae, stéig, etc.13 Cónaíonn AhR neamhliganded sa chitosól i gcoimpléasc próitéine a chuimsíonn dimer próitéin turraing teasa 90 (HSP90) agus na comh-chaperones AIP agus p23.14 Nuair a bhíonn sé ceangailte le ligand, cuirtear AhR i ngníomh agus téann sé isteach an núicléas, áit a gceanglaíonn sé le tras-locator núicléach AhR (ARNT), agus cuireann sé tras-scríobh go leor géinte iartheachtacha éagsúla chun cinn.15 Tá ligands do AhR thar a bheith éagsúil agus d'fhéadfaí iad a rangú mar eisghineach nó inghineach. Ceanglaíonn ligands le foinsí agus struchtúir éagsúla le AhR le cleamhnais éagsúla agus d'fhéadfadh siad éifeachtaí fiseolaíocha nó paiteolaíocha éagsúla a spreagadh.16 Léirigh staidéir roimhe seo go raibh feidhmeanna frith-athlasadh,17 frith-apoptosis,18 ag rialú timthriallta cille19 agus ag rialáil AhR lena bhealaí le sruth. imdhíonacht,20 ar comhpháirteanna tábhachtacha iad de phaitigineas AKI. Is ó mheitibileacht tryptophan den chuid is mó a thagann ligands endogenous do AhR. 6-formylindolo[3,2-b]carbazole (FICZ), táirge fóta-ocsaídiúcháin de tryptophan, a bhfuil ard-chleamhnas aige le AhR.21 Roimhe seo, léirigh FICZ éifeachtaí cosanta i múnlaí galair éagsúla.{{ 19}} Cé gur aimsigh imscrúdaitheoirí go raibh drochthionchar ag tocsainí úiréamacha gníomhachtaithe AhR in othair a bhfuil galair ainsealacha orthu.galair duáin(CKD),25 níor thomhais aon staidéar a athruithe slonn in AKI. Níl sé soiléir freisin an bhfuil aduánachéifeacht chosanta i rhabdomyolysis agus I/R AKI spreagtha, toisc go bhféadfadh AhR éifeachtaí iartheachtacha iomlána éagsúla a ghníomhachtú.
Turgnaimh ainmhitheRinneadh na prótacail turgnamhacha agus na nósanna imeachta ainmhithe go léir de réir na bPrionsabal Eiticiúla i dTuairisciú Ainmhithe arna nglacadh ag Ollscoil Turgnaimh Sichuan agus arna gceadú ag Coiste Eitice um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Ollscoil Sichuan. Ceannaíodh lucha fireann C57BL/6 (10-12 seachtaine, meáchan idir 25 agus 27 g) ó Ionad Saotharlainne Ainmhithe Ollscoil Sichuan (Chengdu, an tSín). Coinníodh na lucha faoi theocht leanúnach (23 ± 2 céim ) agus coinníollacha éadroma / dorcha (12/12 uair an chloig), le rochtain saor in aisce ar uisce agus bia. Cuireadh na lucha in oiriúint don timpeallacht seo ar feadh seachtaine amháin roimh a thuilleadh taighde. Sa tsamhail rhabdomyolysis, roinneadh na lucha go randamach i gceithre ghrúpa: rialú (n {{10}}), FICZ (n 6), gliocról (n 6) agus gliocról móide FICZ (n=6). Instealladh na lucha sa ghrúpa gliocról le 50 faoin gcéad gliocról tuaslagtha i 0.9 faoin gcéad salanda gnáth (meáchan coirp 9 μL/g) isteach sa ghéaga droma go déthaobhach chun rhabdomyolysis-in laghdaithe AKI a spreagadh. Idir an dá linn, fuair na lucha sa ghrúpa rialaithe an méid céanna salainn trí instealladh ionmhatánach. Maidir leis an ngrúpa gliocról móide FICZ, rinneadh FICZ a thuaslagadh i 2.5 faoin gcéad PEG400 agus caolaithe i 0.9 faoin gcéad saline gnáth le tabhairt go hinfheidhmeach ag dáileog de 100 ug/kg/d ar feadh ceithre lá as a chéile roimh instealladh gliocról. Riaradh na lucha sa ghrúpa FICZ intraperitoneally na dáileoga céanna de FICZ ar feadh ceithre lá as a chéile, gan instealladh gliocról.
Feabhsaíonn CISTANCHE TEIP Duán/Duánach
Sa tsamhail ischaemia-reperfusion duánach, roinntear na lucha go randamach i gceithre ghrúpa: rialú (n=6), FICZ (n=3), I/R (n=6) agus I /R móide FICZ (n=10). Fuarthas an díobháil sa ghrúpa I/R trí chromáin duánacha a chlampáil le teanntáin mhicreashoithíoch neamh-thrámach ar feadh 30 nóiméad, agus athfhionnadh 24 uair tar éis an clamp a bhaint ina dhiaidh sin. Deimhníodh occlusion agus reperfusion ag athruithe datha ar anduáin. Chuaigh na lucha sa ghrúpa rialaithe faoi na nósanna imeachta máinliachta céanna ach amháin i gcás pedicles clampála. Maidir le grúpa I/R móide FICZ, riaradh FICZ mar a luadh thuas ar feadh ceithre lá as a chéile roimh shamhaltú I/R. Mar an gcéanna, tugadh na dáileoga céanna de FICZ do lucha sa ghrúpa FICZ ar feadh ceithre lá as a chéile agus bhí taithí acu ar gach gnáthamh máinliachta mar an ngrúpa rialaithe. Eotanaíodh dhá bhaisc de lucha faoi seach trí instealladh sóidiam pentobarbital (50 mg/kg, ip) agus íobairt ag 24 uair tar éis samhaltú. An serum agusduánBailíodh samplaí agus stóráladh iad −80 céim le haghaidh tuilleadh anailíse.
Measúnachtaí bithcheimic serumRinneadh samplaí fola a lártheifneoiriú láithreach ag 1509.3 g ar feadh 20 nóiméad chun serum a leithlisiú le haghaidh tástála. Braitheadh na leibhéil creatinine serum (sCr), úiré agus creatine kinase (CK) ag anailíseoir bithcheimiceach uathoibríoch (Mindray BS-240). Ba léiriú ar shamhaltú rathúil AKI iad leibhéil scr na ngrúpaí samhaltaithe a d'ardaigh suas le dhá uair dá luachanna rialaithe.
Meastóireacht histeolaíochSocraíodh fíocháin duáin i formalin maolánach neodrach 10 faoin gcéad, a fuair bás leabaithe i pairifín, agus alt ag tiús 4 μm. Bhí na hailt dhaite le tréimhsiúil aigéad-Schiff (PAS) tar éis deparaffinization agus rehydration. Rinneadh iniúchadh ar chodanna daite PAS faoi mhicreascópacht solais ar mhéaduithe ×200 nó ×400. Roghnaíodh deich réimse go randamach ag formhéadú ×200 ó gach roinn agus roghnaíodh dhá roinn go randamach as gach sampla de thrí cinn ar a laghad i ngach grúpa le haghaidh anailís leathchainníochtúil. Rinneadh measúnú ar athruithe histeapaiteolaíocha de réir céatadán na ndaoine a gortaíodh/a ndearnadh damáiste dóibhduánachfeadáin, mar a léirítear le dilation feadánacha, lysis, cur isteach agus foirmiú teilgthe. Scóráladh gortú fíocháin ar scála {{0}}, le 0, 1, 2, 3 agus 4 ag freagairt do 0 faoin gcéad ,<25%, 26%-50%,="" 51%-75%="" and="">76 faoin gcéad de na gortaithe/damáisteduánachfeadáin, faoi seach.26
Staining imdhíonfluaraiseachtLuch frozeduánGearradh fíocháin, leabaithe in OCT, i gcodanna 4-μm-tiubh ar chrióstat agus stóráiltear iad ag −80 céim go dtí go stainníodh iad. Cuireadh saline maolánach fosfáite (PBS) ina raibh séiream capall 5 faoin gcéad i bhfeidhm ar feadh 1 uair ag teocht an tseomra chun suíomhanna neamhshonracha ceangailteach a bhlocáil. Ansin goradh na hailt le hantasubstaintí príomhúla i seomra tais ag 4 chéim thar oíche. Tar éis níocháin le PBS, baineadh úsáid as an antasubstaint tánaisteach comhfhreagrach ar feadh 1 uair an chloig, ag seachaint solas. Ansin nite na samplaí le PBS, daite le DAPI (D8200, Solarbio), agus ar deireadh gléasadh iad le clúdaigh chlúdaigh. Cuireadh PBS in ionad antasubstaintí príomhúla i rialuithe diúltacha. Cuireadh antasubstaintí tánaisteacha (caolú 1:500; Jackson ImmunoResearch) a mheaitseáil le príomhantasubstaintí chun comharthaí fluaraiseacha a onnmhairiú. Ghabh bogearraí micreascópachta ZEN 2012 (eagrán gorm) íomhánna agus rinne siad anailís orthu.
Imdhíon-cheimicBhí fíocháin duán seasta go foirmiúil, díhiodráitithe, leabaithe i bpara-eite, altáilte ag tiús 5 μm, agus ina dhiaidh sin suite ar shleamhnáin ghloine. Cuireadh bac ar na sleamhnáin ansin le 2.5 faoin gcéad de ghnáthshéiream gabhar agus goradh iad le príomhantasubstaintí ag 4 chéim. Rinneadh na sleamhnáin a ní trí huaire i PBS, agus d'úsáideamar VECTASTAIN ABC Kit (Vector) le haghaidh staining. Gabhadh íomhánna trí úsáid a bhaint as bogearraí micreascópachta ZEN 2012 (eagrán gorm).
staining TUNELBhí fíocháin duán seasta go foirmiúil, leabaithe i pairifín, agus rannánaithe ag tiús 4 μm. Baineadh úsáid as an gCóras TUNEL Fluairmhéadrach DeadEnd™ (G3250, Promega) ar an ruaimniú lipéadaithe foirceann nicil dUTP deoxynucleotidyl transferase-idirghabhála teirminéil (TUNEL). Le haghaidh staining núicléach, goraíodh na hailt le DAPI (D8200, Solarbio) ag caolú 1:500. Cuireadh íomhánna i láthair trí mhicreascópacht fhluaraiseachta ag méadaithe ×400. Rinneamar cealla dearfacha a chomhaireamh agus scrúdaíomar 10 réimse ar a laghad in aghaidh na coda i ngach sampla.
Feabhsaíonn CISTANCHE FEIDHM Duán/Duánach
Anailís blot an IarthairTá anfíochán duáinRinneadh cealla s nó HK{{{0}} a aonchineálú le maolán lysis deascadh imdhíonachta raidió (RIPA) (P0013B, Beyotime Biotechnology) ina raibh coscairí 1‰ proteinase (Keygen Biotech). Tar éis lártheifneoiriú (18 894.2 g, ag 4 céim ) ar feadh 15 nóiméad, bailíodh an súiteán, agus socraíodh tiúchan próitéine ag Kit Measúnachta Próitéin aigéid bicinchoninic (Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime) de réir threoracha an mhonaróra. Scaradh lísáit próitéine le méideanna comhionanna le 10 faoin gcéad - 12 faoin gcéad SDS-LEATHANACH agus ina dhiaidh sin aistríodh go membrane défluairíde polaivinilideine (Bith-Rad). Cuireadh bac ar na seicní le 5 faoin gcéad de bhainne tirim neamhshaille (w/v) i saline maolánach Tris le 0.1 faoin gcéad Tween-20 (TBS-T) ar feadh 1 uair ag teocht an tseomra agus ansin gortha iad le príomhantasubstaintí comhfhreagracha. thar oíche ag 4 céim . Tar éis iad a rinsiú faoi thrí le TBS-T ag eatraimh 5-nóiméad, goradh na seicní le antasubstaintí tánaisteacha comhchuingeacha HRP ag teocht an tseomra ar feadh 1 uair an chloig. Rinneadh na blots próitéine ar na seicní a léirshamhlú ag Foshraith HRP Chemiluminescent Immobilon Western (Millipore Corporation) le Bio-Rad Chemi Doc MP. Rinneadh anailís densitometry ag baint úsáide as bogearraí ImageJ 6.0 (Institiúidí Náisiúnta Sláinte) agus úsáideadh -actin mar rialú luchtaithe.
Anailís chainníochtúil PCR fíor-amaRNA iomlán ó reoiteduánRinneadh samplaí a leithlisiú le trealamh leithlisithe RNA iomlán Ainmhithe (Foregene). Cinneadh an tiúchan de mRNA scoite trí úsáid a bhaint as cinnteoir ScanDrop 100 (Analytik Jena) agus rinneadh cDNAanna a shintéisiú trí úsáid a bhaint as trealamh imoibrí PrimeScript™ RT (Takara Bio). Rinneadh PCR fíor-ama cainníochtúil ag baint úsáide as iTaq™ Universal SYBR Green Supermix (Bith-Rad) i gcóras PCR (CFX Connect; Bio-Rad) tar éis trascríobh droim ar ais. Tá seichimh primer liostaithe i dTábla S1. Ríomhadh na cainníochtaí géine coibhneasta leis an modh 2−∆∆Ct i gcomparáid leis na leibhéil slonn -actin.
Cultúir agus cóireáil cilleBa bhronntanas cineálta ón Ollamh Xueqing Yu (Ospidéal Daoine Cúige Guangdong) agus saothraithe i meán (DMEM)/F12 (SH30023. 01B, Hyclone) é an líne chill tubular dhuánach dhuánach daonna (HK{0}}) arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad serum bó féatais (SH30084. 03, Hyclone), ag 37 céim faoi atmaisféar humidified de 5 faoin gcéad CO2 agus 95 faoin gcéad aeir Sa mhúnla mióglóibin, roinneadh na cealla i stát fáis easpónantúil i gceithre ghrúpa: an grúpa FICZ, gortha le 100 nmol/L FICZ ar feadh 24 uair; an grúpa mióglóibin, gortha le 200 μmol/L mióglóibin neamhfheiriúil ar feadh 24 uair an chloig; an grúpa Mb móide FICZ, arna ghoradh le FICZ ag 100 nmol/L le cóireáil mióglóibin a thabhairt; agus grúpa rialaithe, goraíodh cealla le meán iomlán ina n-aonar sa ghrúpa rialaithe. Ullmhaíodh mióglóibin neamhfheiriúil mar a thuairiscítear roimhe seo.26,27 Sa tsamhail hypoxia/reoxygenation (H/R), roinneamar na cealla HK-2 i dtrí ghrúpa. Saothraíodh na cealla sa ghrúpa H/R faoi choinníollacha hipocsaíocha (1 faoin gcéad O2, 94 faoin gcéad N2 agus 5 faoin gcéad CO2) i meán gan séiream ar feadh 12 uair an chloig chun hipocsa a chothú. Ansin aistríodh na cealla ar ais go meán cultúir rialta le ocsaigin ar feadh 6 uair an chloig le haghaidh ath-ocsaiginithe. Goradh cealla rialaithe i meán cultúir iomlán i gorlann rialta. Tugadh riarachán FICZ (100 nmol/L) sa ghrúpa H/R móide FICZ díreach roimh oibriú H/R.
Iarscríbhinní V-FITC/measúnacht iaidíde próidiamChuireamar an trealamh anailíse apoptosis V-FITC i bhfeidhm (AO2001- 02PH, SUNGENE). Síolaíodh cealla HK-2 i bplátaí sé thobar. Tar éis a bheith faoi lé meáin éagsúla ar feadh 24 uair an chloig, scoiteadh na cealla cloíte le trypsin. Ansin, athshuíodh na cealla i maolán ceangailteach agus dhaite le 5 μL de Annexin V-FITC agus 5 μL de iaidíd propidium (teocht an tseomra, 15 nóiméad, ag seachaint dorcha). Sainaithníodh cealla apoptotic le cítoiméadar sreafa.
Anailís staitistiúilTugadh sonraí mar mheán ± SD. Rinneadh anailís ar luachanna staitistiúla le haghaidh comparáidí grúpa iolracha ag ANOVA aontreo, agus rinne tástáil SNK comparáid péirewise. Rinneadh gach anailís staitistiúil in SPSS 21.0. Measadh go raibh P < 0.05="" suntasach="" go="">
TORTHAÍ
Rinne agonist AhR FICZ maolú ar AKIChun a fhíorú an soláthraíonn FICZ éifeacht athchosanta, bhunaíomar samhlacha AKI spreagtha rhabdomyolysis agus ischemia/reperfusion (I/T). Ansin rinneamar measúnú ar fheidhm duánach agus athruithe paiteolaíocha sna fíocháin duáin. Níl aon suaitheadh suntasach i leibhéil serum creatiníne, úiré, CK, gníomhaíochtaí meitibileach einsímí ae
sa ghrúpa FICZ breathnaíodh (Fíor 1A-C; Tábla S3). Mar a léirítear i bhFíor 1A-B, laghdaigh riarachán FICZ go suntasach an t-ardú suntasach ar leibhéil creatinine serum agus úiré ag 24 uair tar éis instealladh gliocról nó máinliacht I/R, gan tionchar a imirt ar an leibhéal serum CK i lucha rhabdomyolysis (Fíor 1C). Idir an dá linn, mhaolaigh stainings PAS FICZ go héifeachtach damáiste paiteolaíoch arb iad is sainairíonna dilation feadánach, swelling, foirmiú teilgthe agus cailliúint teorann scuab i gcomparáid le samhlacha AKI sa dá mhúnla (Fíor 1D-E). Léirigh staining imdhíonfluaraiseachta agus torthaí PCR fíor-ama gur laghdaigh úsáid FICZ go suntasach léiriú agus trascríobh lipocalin a bhaineann le gelatinase neutrophil (NGAL), bithmharcóir díobhála duánach, sna daoine gortaithe.duáin(Fíor 2A-D). Ar an gcaoi chéanna, chuir FICZ bac freisin ar an leibhéal mRNA de bharr gliocról-spreagthagortú duáinmóilín 1 (KIM1) tar éis an instealladh de gliocról (Fíor 2A).
Rinneamar scrúdú breise ar thrascríobh agus ar léiriú AhR induánfíocháin. I bhFíor 3, chuir torthaí rt-PCR, blotting an iarthair, imdhíon-histochemistry agus staining imdhíonfhluaraiseacht bac ar an laghdú go suntasach ar leibhéil mRNA agus próitéine AhR sa dá ghrúpa samhaltaithe AKI. Spreag instealladh intraperitoneal de FICZ go mór a thrascríobh agus a léiriú i ngrúpaí gliocról móide FICZ agus I/R móide FICZ. Toisc go bhfuil ról ríthábhachtach ag cealla epithelial tubular duánach in AKI,28 rinneamar tástáil an bhféadfaí AhR a chur in iúl i gcealla epithelial feadánacha. Léirigh torthaí imdhíoncheimiceacha gur cuireadh AhR in iúl go príomha i dtiúbáin duánach (Fíor 3C-D). Chomh maith leis sin, dhaite ailt fíocháin duáin le lectin, marcóir do chealla epithelial feadánacha proximal, AhR agus DAPI do núicléis. Mar a léirítear i bhFíor 3E-F, chumasc AhR le lectin, rud a thugann le fios go gcuirtear AhR in iúl go príomha i gcealla epithelial feadánacha cóngaracha. Le chéile, thug FICZ cosaint i gcoinne rhabdomyolysis agus AKI spreagtha I/R trí ghníomhachtú AhR sna daoine gortaithe.duáin.
Laghdaigh FICZ táirgeadh cítocine pro-athlastach i duáin lucha AKIChun a mheas an raibh FICZ in ann athlasadh a tharraing AKI chun cinn, baineadh úsáid as q-PCR chun leibhéil trascríobh fachtóirí pro-athlastacha sna duáin a bhrath. Mhéadaigh leibhéil mRNA IL-1 , IL-6 agus TNF- i bhfíocháin duánach go mór trí instealladh gliocról nó gortú I/R, agus laghdaigh riarachán FICZ na tras-scríbhinní géine seo go suntasach (Fíor 4A). Go comhsheasmhach, rinne cóireáil FICZ (Fíor 4B-C) an t-ingearchló de IL-1 , IL-6 agus TNF- a mhaolú go héifeachtach trí chóireáil FICZ (Fíor 4B-C). Thug na torthaí seo le tuiscint go bhféadfadh FICZ athlasadh duánach i samhaltú AKI a mhaolú.
FICZ laghdaithe apoptosis cille i duáin na lucha AKIChomh maith le athlasadh, is gné thábhachtach eile é apoptosis cille i pathogenesis AKI. Chuireamar staining TUNEL i bhfeidhm chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeacht FICZ ar apoptosis duánach i lucha I/R-spreagtha. Mar a léirítear i bhFíor 5B, laghdaigh FICZ go suntasach líon na gcealla TUNEL-dearfach saduáinde lucha I/R. Thairis sin, tá an
Léirigh torthaí staining imdhíon-histochemical gur laghdaigh riarachán FICZ sa tsamhail rhabdomyolysis go suntasach an léiriú ar caspase scoilte-3, gníomhaí ríthábhachtach a mhodhnaíonn próitéiní a bhaineann le apoptosis, ag riarachán FICZ sa tsamhail rhabdomyolysis (Fíor 5A). Idir an dá linn, d'fhéadfadh FICZ leibhéil mRNA caspase a laghdú i samhlacha rhabdomyolysis agus AKI spreagtha I/R araon. Ina theannta sin, léirigh torthaí blot an iarthair go bhféadfadh FICZ slonn caspase scoilte-3 agus Bax a íos-rialáil, agus leibhéal Bcl-2 a uasghrádú saduáinde lucha AKI (Fíor 5C). Go hachomair, léirigh na torthaí seo gur léirigh FICZ éifeachtaí frith-apoptotic saduáinde lucha AKI.
Chuir FICZ comharthaíocht NF-κB agus JNK faoi chois i nduáin lucha AKI
Rinneadh tuilleadh iniúchta ar ghníomhachtú conairí comharthaíochta le hanailís blotála an iarthair chun meicníocht frith-athlastach agus frith-apoptotic FICZ a dhéanamh amachduáinde lucha AKI. Mar a léirítear i bhFíor 6, ba léir go raibh na leibhéil fosfarylation de IκB agus P65 i nduáin lucha AKI níos airde ná iad siúd de ghrúpaí atá cóireáilte ag FICZ. Ina theannta sin, léirigh staidéir roimhe seo go bhféadfadh comharthaíocht JNK apoptosis a mhodhnú agus idirghníomhú le comharthaíocht NF-κB.29 Fuaireamar amach go raibh fosfarylation JNK thar a bheith níos airde i gcomparáid le grúpaí rialaithe faoi seach, ach d'aisiompaigh cóireáil FICZ iad go héifeachtach. Tógtha thuas, thug na torthaí seo le tuiscint gur chuir na cosáin NF-κB agus JNK le gníomhaíocht frith-athlastach agus frith-apoptotic FICZ i duáin lucha AKI.
Cosain FICZ cealla HK-2 ó spreagadh mióglóibin agus gortú H/R trí athlasadh agus apoptosis a choscRinneamar fianaise ar cibé an bhféadfadh gníomhachtú AhR ag FICZ athlasadh agus apoptosis a chosc i gcealla epithelial tubule proximal daonna (HK-2) arna spreagadh ag mióglóibin. Ar an gcéad dul síos, dheimhnigh muid go raibh na léirithe in vitro de AhR i gcealla spreagtha mióglóibin nó gortaithe H/R laghdaithe go suntasach, ach rinne FICZ (Fíor 7B-D) iad a aisiompú. Braitheadh ráta apoptosis cille de gach grúpa sa mhúnla mióglóibin ag cítoiméadracht sreafa (Fíor 7A). I gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, ní raibh aon mhéadú ar apoptosis agus necróis cealla HK-2 sa ghrúpa FICZ. I gcodarsnacht leis sin, tar éis spreagadh mióglóibin, léirigh cealla HK-2 líon mór cealla apoptotic arbh ionann iad agus 12.3 faoin gcéad . Cé gur léirigh grúpa Mb móide FICZ i bhfad níos lú cealla apoptotic. Ina theannta sin, rinne FICZ síos-rialú ar na slonn de caspase scoilte-3 agus Bax i gcealla HK-2 spreagtha mióglóibin nó H/R gortaithe (Fíor 7BD). Ina theannta sin, d'aisiompaigh FICZ (Fíor 7B-D) an t-ingearchló mióglóibin nó H/R-spreagtha ar fhachtóirí pro-athlastacha go suntasach. Go comhsheasmhach, bhí na leibhéil fosfarylation de P65 agus JNK thar a bheith níos airde tar éis spreagadh mióglóibin nó díobháil H/R, ach mhaolaigh cóireáil FICZ iad go héifeachtach (Fíor 7B-D). Mar sin, léirigh na torthaí sin gur chosain agónaí AhR FICZ cealla HK{-2 i gcoinne mióglóibin agus H/R trí athlasadh agus apoptosis a chosc.
PLÉ
Sa staidéar reatha, fuaireamar amach go bhféadfadh an agonism AhR ag FICZ maolúdamáiste duáini rhabdomyalú agus ischemia/AKI a tharchuirtear le hathfhriotú. Bhí AhR i láthair go príomha i gcealla epithelial tubular proximal, agus d'fhéadfadh agonist AhR FICZ cealla epithelial feadánacha proximal a chosaint i gcoinne AKI trí athlasadh agus apoptosis cille a rialáil trí bhealaí comharthaíochta NF-κB agus JNK. Fuair staidéir roimhe seo amach go raibh tocsainí uraemacha, cosúil le sulfáit indocsaile, agonists de AhR.30 Bhí Othair le CKD faoi lé na tocsainí úiréacha sin, dá bhrí sin tá AhR tar éis othair chónaitheacha agus lucha a ghníomhachtú le CKD.25,31 Fuair staidéir le déanaí go raibh meitibilítí ingenous ó gut microbiota32 nó d'fhéadfadh meitibileacht uraemic AhR33,34 a ghníomhachtú sna duáin de lucha agus francaigh CKD, rud a léirigh treochtaí difriúla ónár dtorthaí i lucha AKI. Mar sin féin, d'fhéadfadh tionchar a bheith ag ligandanna ar leith do AhR ar bhealaí comharthaíochta iartheachtacha éagsúla.35 Ina theannta sin, léirigh taighde roimhe seo ar AKI go bhféadfadh leflunomide AhR a ghníomhachtú in AKI spreagtha I/R agus feabhas a chur ar dhamáiste paiteolaíoch duánach trí dhíolúine a rialáil agus athlasadh a chosc.36 MiR{{ 11}}b ghníomhaigh sé AhR trí athbhrúiteoir AhR a chosc agus chosain sé an duán ó ghortú cisplatin.gortú duáintrí ionduchtú AhR spleách CYP1A1/2 san ae.38 Bhí ár dtorthaí comhsheasmhach leis na torthaí roimhe seo ar AKI. Ina theannta sin, d'fheidhmigh agonist AhR FICZ éifeachtaí cosanta i múnlaí galair éagsúla cosúil le siondróm meitibileach, 39 uveitis autoimmune, colitis 22, psoriases 23, 24 etc.
De réir torthaí le déanaí ó Huang et al, 22 samhaltú uath-imdhíonachta turgnamhach uveitis ghníomhaigh cosáin NF-κB agus STAT1/3 agus uas-rialaíodh léirithe fachtóirí pro-athlastacha iartheachtacha IL-1 , IL-6 agus TNF - . Idir an dá linn, mhéadaigh apoptosis cille. Le cóireáil agonist AhR, fuarthas léirithe laghdaithe de cítocíní pro-athlastacha agus cosc ar chonair NF-κB. Mar thoradh ar ghníomhachtú AhR freisin cuireadh cosc ar apoptosis cille. Bhí na torthaí seo comhsheasmhach lenár dturgnamh. Fuair siad amach freisin gur aistrigh gníomhachtú AhR polarú macrophage ó M1 i dtreo M2. Mhol sé go bhféadfadh AhR páirt a ghlacadh i rialáil imdhíonachta, rud a bhí ina mhíniú féideartha eile ar rialáil cítocíní réamh-athlastacha iartheachtacha. Bhí roinnt tuarascálacha ann maidir le comhghaol diúltach idir AhR agus fo-aonad RelA (P65) de léiriú NF-κB i gcealla éagsúla. Rinneadh comh-imdhíon-fhuascailt le sleachta cille iomlána de chealla Hepa1c1c7. Ós rud é go bhféadfadh AhR agus NF-κB araon dul faoi thraslonnú núicléach atá ag brath ar chomharthaí, agus nach bhfuarthas go raibh baint ag ARNT le P65, mar sin glactar leis go raibh comhlachas AhR agus P65 go príomha san urrann cíteaplasma.40 Gníomhaíochtaí trascríobh an Tá AhR agus NF-κB modhnaithe ag comhghníomhaithe trascríobh. Mar a tuairiscíodh roimhe seo, bhí forluí páirteach idir a gcomhghníomhaithe. Dá bhrí sin, is féidir go bhféadfadh iomaíocht a bheith ann do cheangal comhghníomhaitheach, sa chaoi is nuair a chuirtear cosán amháin i ngníomh, déanfar an cosán eile a bhrú faoi chois trí iomaíocht le haghaidh infhaighteachta comhghníomhaithe.41 Fíoraíodh an comhghaol diúltach arís le taighde epigenetics.42 Idir an dá linn, NF -κB tionchar ag JNK, b'fhéidir trí speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS).29 D'fhéadfadh ROS mitochondrial gníomhachtú NF-κB a chur chun cinn, agus cuireann JNK le giniúint ROS, rud a spreagann gníomhachtú JNK. Cé gur gá tuilleadh imscrúdaithe a dhéanamh ar an meicníocht mhionsonraithe, d’fhéadfaí glacadh leis go bhfuil comhghaol dearfach idir conairí NF-κB agus JNK.
Feabhsaíonn CISTANCHE Péine Duán/Duánach
Fuarthas amach i dtaighde roimhe seo43,44 gur tháinig méadú thar cuimse ar athlasadh agus apoptosis cille sna grúpaí samhaltaithe i rhabdomyolysis agus I/R de bharr AKI, agus cuireadh cosáin NF-κB agus JNK i ngníomh. Bhí na torthaí seo comhsheasmhach lenár dtorthaí. I measc na meicníochtaí is mó de AKI bhí hypoxia, freagra ar strus ocsaídiúcháin, agus athlasadh. D’fhéadfadh siad bás cille (apoptosis, autophagy, necróis) nó athmhúnlú fíocháin a chur chun cinn. Scaoileadh gortú cille nó bás substaintí le patrúin mhóilíneacha a bhaineann le damáiste (DAMPanna) agus patrúin móilíneacha a bhaineann le pataigin (PAMPanna), rud a mhéadaigh athlasadh a thuilleadh.45 Mhéadaigh idirghníomhaíochtaí DAMPanna agus PAMPanna le braiteoirí an chórais imdhíonachta dúchasach freagairt athlastach freisin.46 In Idir an dá linn, bhí baint ag bás cille lena n-áirítear apoptosis freisin le pataigineas AKI. Tá léirithe teaghlaigh Caspases suas-rialaithe, agus athraíonn rialtóirí frith-apoptotic agus proapoptotic iolracha-ath-ghaolmhara le linn AKI.26,47,48 Tógtha le chéile, cuireann athlasadh agus apoptosis cille chun cinn a chéile agus imríonn an dá ról ríthábhachtach in AKI. Fuaireamar amach gur mhaolaigh gníomhachtú AhR ag FICZ athlasadh agus apoptosis trí chosc a chur ar bhealaí NF-κB agus JNK.
Mar sin féin, tá roinnt fadhbanna fós le fiosrú. Rinne ár staidéar iniúchadh go príomha ar na héifeachtaí ath-chosanta a bhaineann le gníomhachtú AhR ag FICZ agus a mheicníocht fhéideartha i rhabdomyolysis agus AKI spreagtha I/R. Ina theannta sin, d’úsáideamar riarachán coisctheach FICZ do lucha roimh shamhaltú AKI. Cé gur úsáideadh an modh riaracháin go forleathan i staidéir roimhe seo, bhí neamhréireachtaí idir na turgnaimh ar ainmhithe agus an cleachtas cliniciúil. Sa todhchaí, tá gá le himscrúdú breise a dhéanamh ar conas a athraíonn léiriú AhR ar fhorbairt AKI agus go sonrach logánú incheallach AhR. Cé go bhfuil an laghdú ar phosphorylation NF-κB agus JNK faoi ghníomh FICZ soiléir, tá gá le tuilleadh turgnaimh ar ghníomhairí blocála ábhartha. Ina theannta sin, chun an mheicníocht a mhíniú níos fearr, tá gá le lucha cnagála AhR agus ró-eisbhrú le haghaidh staidéar in vivo, agus tá gá le ró-léiriú agus ciúnas AhR le haghaidh staidéar in vitro. Ina theannta sin, tá i bhfad níos mó taiscéalaíochta de dhíth ar conas a théann ligands éagsúla i bhfeidhm ar bhealaí comharthaíochta éagsúla AhR.
