Laghdaíonn Nanacháithnín Duán-Dírithe chun Dlús Lymphatic Duánach a Mhéadú Brú Fola i Lucha Hipirtheannas
Nov 10, 2023
Coimriú:Athlasadh interstitial ainsealachagus tá ról lárnach ag insíothlú duánach ar chealla imdhíonachta gníomhachtaithe i Hipirtheannas. Rialaíonn lymphatics athlasadh tríimréiteach cealla imdhíonachtaagus an iomarca sreabhach interstitial. Roimhe seo, léirigh muidag méadú lymphangiogenesis duánachcosc Hipirtheannas i lucha. Rinneamar hipitéisiú go spreagfadh seachadadh nanacháithníní spriocdhírithe fachtóir fáis inotelial soithíoch-C (VEGF-C) chuig an duán lymphangiogenesis duánach, ag ísliú brú fola i lucha hipirtheannas. Lódaíodh nanacháithnín a dhírigh ar na duáin le cineál sonrach VEGF-C de VEGF-C receptor agus cuireadh isteach é i lucha le Hipirtheannas arna spreagadh ag angiotensin II nó Hipirtheannas spreagtha ag LNAME gach 3 lá. Thaispeáin lucha a bhí cóireáilte le nanacháithníní dlús agus leithead méadaithe soithí limfeach duánach i gcomparáid le lucha hipirtheannas a stealladh le VEGF-C amháin. Nanoparticle-cóireáilte lucha ar taispeáint laghdú systolic brú fola, laghdaighcealla imdhíonachta pro-athlastach duánach, agus eisfhearadh codánach fual méadaithe sóidiam. Léiríonn ár dtorthaí go laghdaítear brú fola ar limfeacha duánach atá ag méadú go cógaseolaíoch agus go mbaineann sé le hathruithe fabhracha icealla imdhíonachta duánachaguseisfhearadh sóidiam méadaithe.
Eochairfhocail:duán; lymphatics;athlasadh; díolúine ; Hipirtheannas
FÉIDIR CISTANCHE A FHOIRMIÚ LUITHEACH DO NA DÚNÁIN
1. Réamhrá
Tá Hipirtheannas ag beagnach 1 in 2 duine fásta SAM, agus tá sé neamhrialaithe i go leor othar [1]. In ainneoin oideachas feabhsaithe, iarrachtaí sláinte poiblí, agus cógais ordaithe, ní féidir le thart ar 30-60% d'othair hipirtheannas brú fola idéalach a bhaint amach. Tá sé seo trua mar go laghdaíonn brú fola systolic fiú 10 mmHg go suntasach rioscaí sláinte agus feabhsaíonn sé torthaí [2]. Tá gá le roghanna cóireála breise chun cabhrú leis an daonra hipirthearcach seo a gcuid brú fola a laghdú, go hidéalach isteach sa raon normotensive.
Tá baint láidir ag insíothlú cille imdhíonachta duánach, athlasadh, agus coinneáil sóidiam le Hipirtheannas [3-5]. Iompraíonn soithí lymphatic sreabhán, leictrilítí, cealla, agus próitéiní amach as an spás interstitial chuig an nód lymph draenála agus ansin ar ais go dtí an gcúrsaíocht [6,7]. Breathnaítear lymphangiogenesis a bhaineann le athlasadh i ngéarghortú duáin agus igalair athlastacha ainsealachamarnephropathy diaibéitisaguscarcinoma duánach[8]. I anstaid athlastach, déanann méadú ar lymphatics iarracht cabhrú le cealla imdhíonachta, próitéiní agus sreabhach a bhaint as an orgán. Thuairiscigh muid roimhe seo go dtarlaíonn lymphangiogenesis freisin sa duán mar fhreagra cúiteach i múnlaí éagsúla Hipirtheannas [9-11]. Mar sin féin, níor leor an méadú cúiteach seo ar lymphatics duánach chun an athlasadh agus an Hipirtheannas a réiteach. Chuir lymphangiogenesis sainiúil duánach i lucha bac ar fhorbairt Hipirtheannas atá íogair ó thaobh salainn, Hipirtheannas spreagtha ar Chosc ar Ocsaíd nítreach (L-NAME), agus Hipirtheannas de bharr angiotensin II (A2HTN), agus bhain sé seo le laghdú ar carnadh cille imdhíonachta duánach agus eisfhearadh sóidiam méadaithe [9,11,12]. Ina theannta sin, mhaolaigh ionduchtú géiniteach lymphangiogenesis duánach-shonrach i lucha LHTN a bhí ann cheana féin, agus bhí méadú ar eisfhearadh sóidiam ag gabháil leis seo [12].
Anseo, bhíomar ag iarraidh teiripeoir aistritheach féideartha a fhorbairt a dhíreodh go sonrach ar an duán agus a chuirfeadh lymphangiogenesis chun cinn chun brú fola a laghdú faoi choinníollacha hipirtheannas. D'úsáideamar teicneolaíocht nanacháithníní le haghaidh seachadadh fachtóir fáis limfeach-shonrach bunaithe ar thuarascálacha roimhe seo ar nanacháithníní a dhíríonn ar na duáin [13-15]. Tá córais seachadta drugaí eile ann a úsáideann nanacháithníní, agus tá siad go léir ceaptha chun éifeachtúlacht, sainiúlacht agus bith-infhaighteacht a fheabhsú. Is féidir nanacháithníní a dhearadh chun airíonna fisiciceimiceacha uathúla cosúil le méid (50 ~ 200 nm), cruth, agus ceimic dromchla a thaispeáint agus is féidir iad a threalmhú chun oibreán diagnóiseach agus / nó teiripeach amháin nó níos mó a iompar, iad a scaoileadh trí thruicear seachtrach cosúil le teocht. , pH, agus einsímí. Chomh maith leis sin, ceadaíonn cuimsiú na n-oibreán teiripeach nó diagnóiseach sin laistigh de nanacháithníní dóibh a leathré sistéamach a fheabhsú, agus dá bhrí sin, is féidir iad a logánú go suntasach chuig an limistéar ar a bhfuil sé dírithe. Faoi láthair, tá nanacháithníní éagsúla lena n-áirítear micelles, liposomes, nanaspheres, nanafeadáin, nanachcapsúil, ciúbasóim, agus hidrogels bunaithe ar a mhoirfeolaíochtaí. Anseo rinneamar tástáil ar nanacháithníní micelle agus liposome chun a chinneadh cé acu a bhí níos éifeachtaí.
Ba é ár hipitéis ná nanacháithnín atá dírithe ar na duáin a sheachadann fachtóir fáis pro-lymphangiogenic, receptor fachtóir fáis endothelial soithíoch-3 (VEGFR-3)-isiform sonrach d'fhachtóir fáis endothelial soithíoch C (VEGF-C) , mhéadódh dlús lymphatic duánach agus laghdódh sé brú fola i lucha fireann agus baineann le A2HTN nó LHTN. Rinneamar hipitéis freisin go mbeadh baint ag an laghdú ar bhrú fola le laghdú ar chealla imdhíonachta duánach pro-athlastach, méadú ar chealla imdhíonachta duánacha frith-athlastacha, agus méadú ar eisfhearadh sóidiam. Mar gheall ar an tréimhse fhada chun Hipirtheannas atá íogair ó thaobh salainn a chothú agus an líon teoranta instealltaí féitheacha eireaball i lucha, níor úsáideadh an tsamhail seo sa staidéar reatha.
2. Ábhair agus Modhanna
2.1. Forbairt agus Tréithriú Nanacháithníní
Ceannaíodh an copolymer bloc PLGA-PEG-folate ó PolySciTech (West Lafayette, IN, USA), agus is féidir an Deimhniú Anailís a thaispeánann an NMR, anailís FTIR, agus GPC a fheiceáil i bhFíor S1. Le húsáid 50 mg de chomhpholaiméir bloc PLGA-PEG-folate, cuimsíodh 10 mg de Coumarin 6 dye, 10 mg de FITC-ovalbumin, nó 1 mg de VEGF-C isteach sna nanacháithníní ag baint úsáide as modh scagdhealaithe chun micelle a dhéanamh. nanacháithnín 1 (NP1). Go sonrach, tuaslagadh an druga agus an polaiméir i sulfocsaíd démheitile (DMSO), agus aistríodh an tuaslagán isteach i scannán scagdhealaithe (MWCO 100,000). Rinneadh an scagdhealú ar feadh 24 h in aghaidh uisce DI. Tar éis sin, lártheifneoiríodh an tuaslagán uiscí de cháithníní agus rinneadh é a fhuaimniú chun na cáithníní a dhíriú. Chun an nanoparticle liposomal a dhéanamh, d'úsáideamar roinnt comhpháirteanna lipid lena n-áirítear DSPC (120 mg), colaistéaról (16 mg), DSPE-PEG-folate (24 mg), agus lí Coumarin 6 (10 mg) nó FITC-ovalbumin (10 mg) . Ar dtús, díscaoileadh na comhpháirteanna go léir thuas i DCM (10 mL) agus ansin baineadh DCM trí shreabhadh aeir chun scannán tanaí a dhéanamh ar dhromchla vials gloine. Ansin, cuireadh 10 ml de PBS isteach sa scannán tanaí chun nana-cháithníní liposomal 2 (NP2) a dhéanamh. Socraíodh méid na nanacháithníní ag scaipthe solais dinimiciúil (DLS) ag baint úsáide as Zetasizer (Malvern Panalytical, Malvern, RA). Coinníodh tiúchan an tsampla ag 0.5 mg/mL. Díorthaíodh an méid imchlúdaithe lí Coumarin 6 óna thomhas ionsúcháin trí 100 µL de nanacháithníní a thuaslagadh i 900 µL DMSO, a scaoil Coumarin 6 isteach sa réiteach DMSO.
Tomhaiseadh ionsú ansin ag 444 nm. Ag baint úsáide as cuar calabraithe réamh-thomhas de ionsúchán Coumarin 6 de réir a thiúchan toirtmheasctha, ríomhadh an tiúchan Coumarin 6 incapsulated (NP1: 5 ± 0.35 mg agus NP2: 4 ± {{10). }}.89 mg do Coumarin 6). Ag baint úsáide as cuar calabraithe réamh-thomhas d'ionsúite FITC-ovalbúimín de réir a thiúchan toirtmheasctha, ríomhadh an tiúchan FITC-ovalbumin imchochlaithe (4 ± 0.51 mg). Chinn ELISA an méid inchamhlaithe de VEGF-C laistigh de NP agus b'ionann é agus ~500 ± 17 µg. Bhí gach NP brataithe le folates a dhíríonn orthu go tubules cóngaracha na duán, ag cur ard-léiriú na ngabhdóirí folate san áireamh. Tá scéimreach a thaispeánann cóimeáil an NP le feiceáil i bhFíor S2
Rinneadh staidéar ar phróifílí scaoileadh Coumarin 6 nó FITC-ovalbumin ag baint úsáide as modh scagdhealaithe feadán membrane. Cuireadh ml amháin de thuaslagán nanacháithníní le feadán scagdhealaithe (Gearr MW 3500) agus ansin tumtha i 10 ml de PBS ina raibh tuaslagán 0.5% v/v Tween 80. Ag an am ar leith, bailíodh na meáin agus cuireadh in ionad iad. Tomhaiseadh déine fluaraiseachta na samplaí bailithe ag Ex/Em=444/500 nm (Coumarin 6) nó Ex/Em=488/530 nm do FITC-ovalbumin ag baint úsáide as léitheoir micreaphláta. Is féidir an % scaoileadh carnach de Coumarin 6 agus FITC-ovalbumin araon ó na nanacháithníní folate a fheiceáil i bhFíor S3.
Maidir leis an staidéar ar mhicreascópacht leictreoin tarchurtha (TEM, JEOL JEM-2010, an tSeapáin), cuireadh fionraí samplach ar ghreille copair brataithe le carbón agus triomaíodh iad faoi choinníollacha folúis. Breathnaíodh an eangach ansin faoi mhicreascóp leictreoin tarchurtha JEOL ag voltas luasghéaraithe 200 kV. Chun bithdháileadh in vivo a chinneadh, cuireadh 100 µL de gach NP1 (10 mg/mL) nó NP2 (10 mg/mL) isteach i lucha baineann C57BL/6J (n=3) tríd an vein eireaball. Taifeadadh comharthaí fluaraiseachta Coumarin 6 ag Ex/Em=444/500 nm. Dhá uair an chloig déag tar éis an insteallta, rinneadh na hainmhithe a eothánú, agus bailíodh gach orgán. Scanadh na horgáin bainte faoi scanóir In Vivo FX Pro chun an dáileadh NP a chainníochtú. D'fhaomh IACUC Ollscoil Texas A&M na nósanna imeachta go léir a dhéantar i lucha de réir Threoir NIH um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Saotharlainne.
2.2. lucha
Ceannaíodh lucha fiáine C57BL/6J ó Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME, SAM). Ionchlannaíodh lucha fireanna agus baineanna 10–14 seachtaine d’aois go máinliachta faoi ainéistéise isoflurane ionanálaithe (1.5–5%) le mionchaidéil osmotic (Alzet, múnla 1004, Cupertino, CA, SAM) ina raibh angiotensin II (490). ng/kg/nóim;BACHEM, Torrance, CA, SAM) (A2HTN), agus lidocaine tráthúla ina dhiaidh sin. Tugadh L-NAME (Sigma, St. Louis, MO, SAM) do ghrúpa eile lucha fireanna agus baineanna ina gcuid uisce óil (0.5 mg/mL) le linn an turgnaimh (LHTN). Tar éis 2 lá, deimhníodh Hipirtheannas trí bhrú fola cuff eireaball i ngach grúpa. Ansin rinneadh na lucha a randamach agus a instealladh sa vein eireaball le nanacháithnín micellar luchtaithe leis an tsóiteán sonrach VEGFR de VEGF-C (VEGF C c156s) [16] nó próitéin VEGF-C saor in aisce gach 3 lá ina dhiaidh sin. ar feadh 16 lá (4 instealladh vein eireaball iomlán). Múnlaíodh an sceideal insteallta seo tar éis obair roimhe seo [17] agus cheadaigh sé go leor ama chun athmhúnlú soithíoch a dhéanamh ag leibhéal leordhóthanach chun brú fola a thionchar. Ina theannta sin, leathnaigh an tréimhse scíthe 3-lae saolré na veins eireaball murine leochaileacha agus an comhartha pro-lymphangiogenic a choinneáil comhsheasmhach. Fiú amháin leis an tréimhse aisghabhála, ní fhéadfadh veins eireaball ach 5 instealladh a láimhseáil sula ndearna siad damáiste neamh-inchúlghairthe. Rinneadh na lucha go léir a íobairt 16 lá tar éis an insteallta tosaigh. Eotanaíodh lucha trí perfusion fíocháin faoi ainéistéise domhain isoflurane agus ansin díláithriú ceirbheacsach sular bailíodh fíocháin. D'fhaomh IACUC Ollscoil Texas A&M na nósanna imeachta go léir a dhéantar i lucha de réir Threoir NIH um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Saotharlainne.
2.3. Brú fola
Tógadh léamha brú fola systolic (SBP) ag pointí éagsúla ama trí chuasán eireaball. Baineadh úsáid as córas fála brú fola neamh-ionrach IITC Life Science le haghaidh lucha (IITC Inc., Woodland Hills, CA, SAM) le haghaidh gach tomhais. Glacadh brúnna fola tar éis 30-nóiméad tréimhse oiriúnaithe i limistéar ciúin ainmnithe. Le linn an ama seo, ceadaíodh an seomra téimh agus na seomraí srianta a théamh go 34 ◦C. Lódáladh lucha go réidh isteach i seomraí srianta de mhéid cuí agus fágadh iad chun dul i dtaithí sa seomra téimh ar feadh 5 nóiméad roimh thomhais SBP. Dhíorthaigh beirt imscrúdaitheoirí neamhspleácha, dallóga tomhais SBP ó na rianaithe brú.
2.4. Bailiú agus Bearta Séiream agus Fual
Bailiú agus Tomhais Séiream agus Fual: Cuireadh lucha i gcliabháin mheitibileach (Hatteras, Cary, NC, SAM) agus ligeadh dóibh aclaíocht thar oíche. Tar éis acclimation, bailíodh fual ar feadh 24 h, ag críochnú le eotanáis. Rinneadh an fual a bailíodh a thomhas. Bailíodh an fhuil tráth eotanúcháin tríd an bhfiontar clé agus leithlisíodh serum le haghaidh bearta níos déanaí. Rinneadh anailís ar shéiream agus fual trí leictreafóiréis ribeach le haghaidh sóidiam ag baint úsáide as Anailíseoir Ceimice DxC 700 AU (Beckman Coulter, Brea, CA, SAM) agus trí potentiometry díreach le haghaidh creatinín ag baint úsáide as Córas Leictreafóiréis Ribeach P/ACE MDQ Plus (Sciex, Redwood City, CA). , SAM). Baineadh úsáid as na bearta seo chun eisfhearadh fuail, eisfhearadh codánach sóidiam (FENa), agus imréiteach creatinine a ríomh.
2.5. Imdhíonfluaraiseacht
Nuair a rinneadh eotasú, bailíodh na duáin, gearrtar iad ina leatha go saighdeach, agus socraíodh iad i dtuaslagán formalin maolánach 10 (Sigma, St. Louis, MO, SAM) ar feadh 48 h. Tar éis an tsocraithe, nitear leatha na nduán in eatánól 100% agus leabaíodh iad i bpaifín. Gearradh leatha na nduán i gcodanna 5-7 µm, a dípharaifíníodh, a athhiodráitíodh, agus a tréscaoilteadh le tuaslagán Triton 0.1% (BioRad, Hercules, CA, USA). Cuireadh bac ar fhíocháin le tuaslagán AquaBlock 10% (EastCoastBio, Berwick Thuaidh, ME, SAM) sula ndearnadh imdhíon-lipéadú leis na marcóirí cealla endothelial lymphatic LYVE-1 nó podoplanin (goat polyclonal; R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) thar oíche. gor ag 4 ◦C. Baineadh úsáid as antasubstaintí tánaisteacha Alexafluor 488 nó 594 (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) chun soithí lymphatic a léirshamhlú. Goradh samplaí le hantasubstaintí tánaisteacha comhchuingeacha cuí ar feadh uair an chloig ag teocht an tseomra. Goradh rialuithe diúltacha gan ach antashubstaint thánaisteach. Suiteáladh gach sleamhnán lipéadaithe le himoibrí frithchéimnithe ProLong Gold ina raibh DAPI (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Baineadh úsáid as córas micreascópachta fluaraiseachta Olympus BX51 le ceamara Olympus Q5 le haghaidh íomháithe. Gabhadh íomhánna ag formhéadú 40 × ag baint úsáide as bogearraí íomháithe Olympus CellSens (Olympus, Shinjuku, Tóiceo, an tSeapáin). Baineadh úsáid as na modhanna céanna chun lymphatics íomhá sa chroí, ae, scamhóg, agus craiceann (10 × nó 20 × formhéadú).
2.6. Imdhíonfluaraiseacht Duánach
Cainníochtú Ó gach rannóg duáin, bailíodh 5-7 íomhá ag 20 × ó limistéir réamhchinnte, go ginearálta ag seachaint lochtanna fíocháin, calyx beag, agus líon mór glomeruli. Baineadh úsáid as ImageJ chun luachanna achair a bhailiú a thomhaiseann líon iomlán na bpicteilín podplanin+ tar éis an tairseach a shocrú don inothelium deimhneach.
2.7. Cainníochtú Leithead Uasta Soithí Liomfótach Duánach
Ó gach rannán duáin, bailíodh íomhánna de gach soitheach limfeach a bhaineann le artaire laistigh den cortex ag 20 ×. Aithníodh soithí lymphatic trí staining podplanin a bheith ann. Baineadh úsáid as ImageJ chun an fad i bpicteilíní a bhailiú den phointe is leithne de gach soitheach limfeach ina bhfuil lumen.
2.8. Cíteiméadracht Sreabhadh
Ag euthanization, bailíodh na duáin, agus baineadh na capsúil. Rinneadh an fíochán a mhionghearradh agus a dhíleá go críochnúil i maolán ina raibh Collagenase D (2.5 mg/mL, Roche Sigma, St. Louis, MO, SAM) agus Dispase II (1 mg/mL, Sigma) ag 37 ◦C ar feadh 1 h. Rinneadh samplaí díleáite a scagadh agus a rinsiú trí strainéir 100 agus 40 µm. Rinneadh an sreabhadh tríd a lártheifneoiriú chun comhpháirteanna ceallacha a leithlisiú, agus cuireadh cealla fola dearga i NH4Cl/EDTA. Rinneadh splenocytes a leithlisiú ar an mbealach céanna lena n-úsáid mar rialuithe antashubstainte agus le haghaidh geataí scaipthe chun tosaigh i gcoinne taobh de mhéid agus de chruth cille imdhíonachta. Athchóiríodh cealla duánach i dtuaslagán 0.1% FBS. Chun ceangal Fc neamhshonrach a chosc, goradh samplaí le hantasubstaint frith-luch CD16/CD32 (BD Pharmingen, San Jose, CA, SAM) ar feadh 10 nóiméad ar oighear. Ansin goradh cealla le antasubstaintí fluaraiseacha-chomhchuingeach i gcoinne CD45, F4/80, CD11c, agus CD3e agus scagadh trí strainer steiriúil 40 µm eile. Ceannaíodh gach antasubstaint ó BD Biosciences. Féach Tábla Ar Líne S1 don phainéal tuairisciúil. Baineadh úsáid as cítoiméadar sreafa BD LSR Fortessa X-20 le bogearraí FACS DIVA (BD Biosciences, San Jose, CA, SAM) chun é a fháil. Rinneadh anailís ar phobail suas le 500,000 cill ag baint úsáide as FlowJo v10.6.2.1 (FlowJo, LLC, Ashland, OR, USA). Rinneadh daonraí CD3e+ a chainníochtú laistigh den gheata CD45+. Bhí daonraí CD3e PacBlue+ diúltach le haghaidh fluairafóir PE agus PerCP-Cy5.5. Rinneadh daonraí F4/80+ agus CD11c+ a chainníochtú laistigh den gheata CD45+/CD3e- (Fíor S4). Bhí na daonraí seo diúltach do fluorophores PacBlue, APC, agus APC-Cy7. Cuirtear torthaí in iúl mar chéatadán de na cealla CD{45+ iomlán in aghaidh na duáin. Tá an straitéis geataí le fáil i bhFíor S4. Tá faisnéis antasubstainte le fáil i dTábla S1.
2.9. Staitisticí
Cuirtear na torthaí i láthair mar phonc-phlota agus modhanna nó meán ± SEM. Rinneadh measúnú ar dhifríochtaí idir 2 ghrúpa ag 2-tástáil t Mic Léinn gan péireáilte agus idir 3 ghrúpa nó níos mó le ANOVA aontreo agus an triail post hoc Mac Léinn–Newman–Keuls ina dhiaidh sin. Socraíodh an leibhéal suntasachta ag 0.05 do gach comparáid. Rinneadh na hanailísí staitistiúla go léir ag baint úsáide as bogearraí SigmaPlot 10 (Systat, San Jose, CA, SAM).
Seirbhís Tacaíochta Wecistanche-An t-onnmhaireoir cistanche is mó sa tSín:
Ríomhphost:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Teil:+86 15292862950
Siopa Le haghaidh Sonraí Breise:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
