3-Gabhdóir adrenergic ar Liomfóicítí insíothlaithe Meall a Chothaíonn IFN- -Sliocht PD-L1 cleithiúnach agus lagaíonn sé Imdhíonacht Frith-meall i Neuroblastoma

Is meall extracranial ilchineálach é Neuroblastoma (NB) a tharlaíonn le linn óige. Gné shainiúil de siadaí NB ná a gcumas neuroendocrine chun catecholamines a secrete, rud a d’fhéadfadh tionchar a bheith aige ar bhealaí comharthaíochta éagsúla i micri-thimpeallacht siadaí (TME), trí ligation gabhdóirí adrenergic. Léiríodh roimhe seo go raibh tionchar ag frithghníomhaíocht shonrach an 3-receptor adrenergic (3- AR) ar chealla meall NB ar fhás agus ar dhul chun cinn siadaí. Anseo, i múnla singeneic murine de NB, bhí sé mar aidhm againn imscrúdú a dhéanamh an raibh tionchar ag an modhnú 3-AR ar fhreagairt chóras imdhíonachta an óstaigh i gcoinne siad. Léiríodh sna torthaí go mbíonn frithghníomhú imdhíonachta mar thoradh ar 3-frithghníomhaíocht AR, ag brath go páirteach ar rannpháirtíocht ais comharthaíochta PD{5}}/PD-L1. Go deimhin, mhaolaigh 3- imshuí AR ar limficítí insíothlaithe siadaí (TILanna) a gcumas IFN- a secrete, rud a laghdaigh an slonn PD-L1 ar chealla meall NB, de bharr insíothlú TILs. Léirigh imscrúduithe breise, trí anailís ghéanómach ar othair NB, go bhfuil comhghaol idir léiriú géine ard ADRB3 agus torthaí cliniciúla níos measa i gcomparáid leis an ngrúpa léirithe íseal agus go mbíonn tionchar ag léiriú géine ADRB3 ar bhealaí éagsúla imdhíonachta. Tríd is tríd, tugann torthaí le fios go bhfuil 3-AR in NB TME in ann an t-idirghníomhú idir an córas imdhíonachta siadaí agus an óstaigh a mhodhnú agus go mbuaileann a fhrithghníomhaíocht go leor bealaí comharthaíochta pro-meall.

Coimriú Grafach

RÉAMHRÁ

Is galar casta agus ilchineálach é Neuroblastoma (NB), agus an cineál ailse is coitianta a diagnóisíodh sa chéad bhliain den saol. Is meall neuroendocrine é NB a eascraíonn as cealla réamhtheachtaithe tiomanta den chliath néaraigh le linn fhorbairt an néarchóras báúil (SNS). Cinneann an bunús sainiúil seo logánú siadaí, a tharlaíonn de ghnáth sa fhaireog adrenal agus/nó ganglia báúil [1]. Tá iompar cliniciúil NB an-athraitheach, ag réimsiú ó siadaí a théann siar go spontáineach, go dtí cinn eile a tháinig chun bheith teasfhulangach do gach teiripí atá ar fáil lena n-áirítear ceimiteiripe dian, máinliacht, radaiteiripe, trasphlandú gascheall uathlógach, agus riaradh retinoids (13-cis-retinoic). aigéad) [2]. Dá bhrí sin tá gá le spriocanna teiripeacha malartacha do na siadaí neamhfhreagracha seo. Léiríonn imdhíonteiripe bunaithe ar choscóirí seicphointe imdhíonachta (ICI) an straitéis is bisiúla le haghaidh roinnt siadaí soladacha [3]. I measc nithe eile, lagaíonn an ais chomharthaíochta ligand bás ríomhchláraithe-1/bás ríomhchláraithe-1 (PD-L1/PD-1) imdhíonacht cille T éifeachteora agus feabhsaíonn sé lamháltas imdhíonachta na gceall meall, ag imirt ríthábhachtach. ról maidir le freagraí frith-meall a mhaolú in ailsí lucha agus daonna araon [4, 5]. Mar sin féin, cé go bhfuil imscrúdú déanta cheana féin ag go leor staidéar ar mheicníochtaí atá mar bhunús le comharthaíocht PD-1/PD-L1 in ailse aosach, is beag atá ar eolas maidir le siadaí péidiatraiceacha. Tá traschaint chasta idir an SNS agus an córas imdhíonachta, trí scaoileadh catecholamine agus gníomhachtú na comharthaí gabhdóirí -adrenergic, in ann a chinneadh an cinniúint an dul chun cinn siadaí i go leor siadaí [6]. D'fhéadfadh sé seo a bheith fíor go háirithe in othair NB ina léiríonn, go deimhin, leibhéil ardaithe catecholamines déine na malignancy [7]. Aithníodh an fochineál 3-receptor adrenergic (3-AR) le déanaí mar rialtóir ríthábhachtach ailse [8–10]. Go háirithe, mar gheall ar a léiriú agus a ghníomhachtú, ar chealla meall agus stromal de mhicrea-thimpeallacht an meall (TME), bealaí comharthaíochta pro-meall atá freagrach as dul chun cinn siadaí i múnlaí réamhchliniciúla éagsúla [11-14]. Anseo, i múnla murine syngeneic de NB, léirigh muid go gcothaíonn 3-AR ar limficítí insíothlaithe siadaí (TILs) IFN{30}} spleáchas PD-L1 uprialú ar chealla siadaí, as a dtagann a seal TME imdhíonachta-sochtadh atá freagrach as éalú siadaí. Ina theannta sin, bhí 3-Ar an bhfrithghníomhaíocht in ann líon na gcealla imoibríocha imdhíonacha CD8+, marfóirí nádúrtha (NK), agus cealla dendritic (DCanna) a mhéadú, agus líon na gcealla imoibríocha imdhíonachta a laghdú. Cealla T (Treg) agus cealla forlíonta Myeloid-díorthaithe (MDSC) in TME. Ina theannta sin, léirigh anailís Kaplan-Meier go raibh baint ag léiriú géine ard ADRB3 le droch-mharthanacht othar NB, agus léirigh anailísí ar thacair shonraí phoiblí éagsúla a bhí ar fáil de shloinneadh NB comhghaol suntasach idir leibhéal slonn géine ADRB3 agus géinte a bhfuil baint acu le conairí comharthaíochta a bhaineann le. an córas imdhíonachta/idirghníomhaíocht meall.

Buntáistí cistanche tubulosa-Antitumor

MODHANNA

Cultúr cille

Néaró-2Fuarthas cealla ailse murine NB ó ATCC (CCL-131) agus fásadh iad i DMEM arna fhorlíonadh le 10% de FBS, 2 mM L-glutamine, 100 U·ml−1 peinicillin agus 100 ug·ml−1 streiptimícin ag 37 céim in atmaisféar uisce-sáithithe, 5% CO2. Rinneadh tástáil rialta ar neuro-2ceall le haghaidh éillithe miocplasma.

Múnla murine singeneic meall

Ceannaíodh lucha baineanna NCI A/JCr 4 seachtaine d'aois ó Charles River Laboratories (Frederick). Ionchlannaíodh Neuro-2ceall (N2A) go subcutaneously i lucha faighteoir A/J trí 1 × 106 chealla a instealladh i 100 ul de PBS ar an taobh dheis. Nuair a foirmíodh cealla N2A meall palpable (thart ar 8 lá), cuireadh tús le cóireálacha. Riaradh cóireálacha dhá uair sa lá le haghaidh SR59230A (Tocris Bioscience) agus feithicil (réiteach fiseolaíoch), agus ag lá 8 agus lá 12 le haghaidh antasubstainte PD-L1 (frith-luch InVivoMAb PD-L1 (B7-xhH1) #BE0101 , Bith X Cell) agus rialú isitíopa (rialú isitíopa InVivoMAb francach IgG2b # BE0090, Bith X Cell). Thug riarachán rialaithe isitíopa IgG2b na torthaí céanna ar fheithiclí dá bhrí sin ní léirítear ach riocht na feithicle sna figiúirí. Seachadadh SR59230A ag 10 mg / kg i dtuaslagán fiseolaíoch trí intraperitoneal (ip); Seachadadh 250 µg de PD-L1 ip i 100 µl Maolán Caolaithe InVivoPure™ pH 6.5 (#IP0065); Seachadadh 250 µg de luch rialaithe isitíopa IgG2b ip i 100 µl de Mhaoláin Caolaithe InVivoPure™ pH 7.0 (#IP0070). Riaradh cóireáil le FTY720 (# 6176, Tocris Biotechne) ag 2 mg / kg in aghaidh an os (po) ó lá 6. Rinneadh an ráta fáis siadaí a mheas trí mhais siadaí a thomhas le caliber, agus ríomhadh mais siadaí mar thoirt {{ 41}} [(fad × leithead)2/2]. Rinneadh lucha a íobairt tar éis 8 lá de chóireáil.

Anailís blot an Iarthair

Bailíodh cealla agus cuireadh iad i maolán RIPA ina raibh manglam coscaire próitéáis. Tar éis cainníochtú, úsáideadh 20 ug de phróitéiní iomlána chun anailís SDS-PAGE agus WB a dhéanamh. Goradh seicní PVDF thar oíche leis na hantasubstaintí príomhúla frith-PD-L1 (ab238697, Abcam), fospho-CREB (ab32096, Abcam), CREB (ab32515, Abcam), p-PKA / / (sc- 32968, Santa Biteicneolaíocht Cruz), -actin (sc-1615, Biteicneolaíocht Santa Cruz), 3-AR (ab94506, Abcam) ag 4 céim agus ansin le antasubstaintí tánaisteacha sonracha ar feadh 1 h ag teocht an tseomra. Braitheadh ​​ceangal na n-antasubstaintí leis na próitéiní sonracha trí úsáid a bhaint as Soiléire an Iarthair ECL Substrate (Bio-Rad) agus fuarthas íomhánna trí Chóras Íomháú Chemidoc (Biorad®). Baineadh úsáid as bogearraí ImageJ chun anailísí cainníochtúla a dhéanamh, agus cuireadh déine comhartha na mbannaí in iúl mar mhéadú fillte i gcoibhneas le luachanna rialaithe.

Comhchultúr do mheasúnacht cíteafluaraiméadrach PD-L1

Síolaíodh cealla meall ar MW24 (45,000 cealla/tobar) agus tar éis 24 h rinneadh iad a chomhshaothrú le limficítí, a fuarthas ó TDLNanna de lucha réamhchóireáilte ar feadh 2 lá le Feithicil nó SR59230A (T2), in a cóimheas síolaithe de 1:10 (meall/limficítí). Ag deireadh na tréimhse goir iomlán (48 h), tarraingíodh siar limficítí mar aon le meán an chomhchultúr trí phíopáil mhín, agus ansin cealla meall scoite trí trypsinization agus marcáilte leis an antasubstaint frith-PD-L1 (CD274 Antibody {). {17}}, eBitheolaíocht™) le haghaidh cainníochtú cítefhluairmhéadrach. Fuarthas cealla dhaite ar Chíteiméadar Sreafa 10 MACSQuant Analyzer (Miltenyi Biotec, Gladbach, an Ghearmáin), agus próiseáladh sonraí ag baint úsáide as bogearraí Flowlogic (Miltenyi Biotec, Gladbach, an Ghearmáin).

Comhchultúr le haghaidh imdhíonfhluaraiseacht PD-L1 agus cainníochtú IFN

Síolaíodh cealla meall ar shleamhnáin micreascóip (20,000 cealla/tobar) i sleamhnán seomra Nunc Lab-Tek 4, agus tar éis 24 h rinneadh iad a chomhshaothrú le limficítí, a fuarthas ó TDLNanna de lucha cóireáilte ar feadh 2 lá le Feithicil nó SR59230A (T2), i gcóimheas síolaithe de 1:10 (meall/limficítí). Tar éis 48 h, bailíodh limficítí sa mheán cultúir trí phíobáil mhín, agus ansin iad a dhiúscairt trí lártheifneoiriú; Baineadh úsáid as forshnáthán chun IFN- a chainníochtú trí theicneolaíocht Luminex xMAP de réir threoracha an déantóra. Go hachomair, rinneadh cainníochtú IFN sa mheán comhchultúrtha trí úsáid a bhaint as Bio-Plex Pro Mouse Cytokine IFN- Set (#171G5017M, Bio-Rad) agus fuarthas sonraí ar MAGPIX System (Luminex, Texas, USA). Rinneadh anailís ag baint úsáide as bogearraí Bio-Plex Manager™ (BIO-RAD, California, USA). Ina ionad sin, úsáideadh cealla meall ar shleamhnáin micreascóp chun an measúnú imdhíonfhluaraiseachta PDL1 a dhéanamh mar seo a leanas. Le haghaidh anailíse imdhíonfhluaraiseachta socraíodh cealla i 3% paraformaildéad i PBS ar feadh 20 nóiméad. Fuarthas tréscaoilteacht trí thuaslagán ina raibh Tween-20 0.5% in PBS a chur leis ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra. Cuireadh bac ar chealla ansin i 3% BSA ar feadh 1 h agus goradh iad le príomh-antasubstaint frith-PD-L1 (ab238697, Abcam) ar feadh 2 h. Ina dhiaidh sin, tar éis níocháin i PBS, goraíodh sleamhnáin le antasubstaint thánaisteach Alexa-fluor 488 ar feadh 1 h. Fuarthas íomhánna trí úsáid a bhaint as micreascóp fluaraiseachta (DMi8 - micreachórais Leica).

Luibh Sínis cistanche plandaí-Antitumor

leictreaphrú siRNA de limficítí le haghaidh 1- 2- agus 3-AR tosta

Aistríodh limficítí a fhaightear ó TDLNanna le siRNAs do 1- (SASI_Mm01_00090154 roghnach, seicheamh: GUGAUCGUGGCCAUCGCCA, Merck), 2- (SASI_Mm{ {5}}, seicheamh: CCAAGUUCGAGCGACUACA, Merck) agus 3-AR (SASI_Mm01_00145466, seicheamh: CAGUGGACGUGCUCUGUGU, Merck) tosta. Go hachomair, rinneadh limficítí a leictrealú le siRNAs (100 nM) ag baint úsáide as an Aonad 4D-Nucleofector X (Lonza) agus an P3 Príomhchill 4D-NucleofectorTM X Kit (V4XP-3024, Lonza). Rinneadh an clár DN-100, a bhaineann go sonrach le leictreaphlandú cille T murine. Tar éis electroporation, saothraíodh limficítí i TexMACS Medium (130-097-196, Miltenyi Biotec) ar feadh 24 h agus ansin comhshaothraíodh iad le cealla meall N2A ar feadh 48 h, mar a thuairiscítear roimhe seo, le haghaidh cainníochtú PD-L1. -Rinneadh éifeachtúlacht tosta ARs i limficítí a mheas trí PCR braoiníní digiteacha mar seo a leanas.

PCR braoinín digiteach do chainníochtú mRNA -ARs

Trascríobhadh RNA droim ar ais ag baint úsáide as iScript Advanced cDNA Synthesis Kit (Bith-Rad). Rinneadh ddPCR ag baint úsáide as ddPCR Supermix for Probes (No dUTP) (Bio-Rad), de réir threoracha monaraíochta, ar chóras QX200 (Bith-Rad) agus C1000 Touch Thermal Cycler (Bio-Rad). Ba iad seo a leanas na measúnachtaí a úsáideadh: Adrb3-FAM (dMmuCPE5088688), Adrb2-FAM (dMmuCPE5089938), Adrb1-FAM (dMmuCPE5100184), Rps18-HEX (dMmuCPE71). Rinneadh anailís ar shonraí ddPCR ag baint úsáide as bogearraí QuantaSoft™ (leagan 1.7.4, Bio-Rad).

RNA-seicheamhú

Cuireadh siadaí excised i maolán RLT (Qiagen) agus homogenized go meicniúil le gentleMACS Octo Dissociator (Miltenyi Biotec, Glad bach, an Ghearmáin) ag baint úsáide as gentleMACS Feadáin M (Miltenyi Biotec, Gladbach, an Ghearmáin). Rinneadh eastóscadh iomlán RNA leis an trealamh RNeasy Plus Mini (Qiagen), ag leanúint treoracha an mhonaróra. Rinneadh cainníochtú RNA trí úsáid a bhaint as Speictreafótaiméadar NanoDrop 2000/2000c (ThermoFisher) agus Ard-Íogaireacht Qubit RNA (HS) (ThermoFisher). Rinneadh measúnú ar sláine RNA ag baint úsáide as Agilent RNA 6000 Pico Kit ar Bhithanailíseoir Agilent agus fágadh gach sampla le huimhir sláine RNA (RIN) níos ísle ná 6.00 as an áireamh. Rinneadh ullmhúchán leabharlainne trí úsáid a bhaint as Kit Óir Prep Leabharlann Iomlán RNA RNA TruSeq (Illumina) de réir threoir an déantóra, le hionchur tosaigh de 500 ng den RNA iomlán. Rinneadh measúnú ar cháilíocht na leabharlainne ag baint úsáide as trealamh Agilent DNA 7500 ar Bhithanailíseoir Agilent, agus ina dhiaidh sin rinneadh cainníochtú leabharlainne ag baint úsáide as 1X dsDNA Ard-Íogaireacht (HS) (ThermoFisher). Rinneadh leabharlanna a sheicheamhú ar Chóras Seicheamhaithe NextSeq 550 (Illumina) ag baint úsáide as Feisteáin Imoibrí Ard-Aschuir (Illumina) NextSeq 500/550 v2.5 (150 timthriall). Rinneadh ritheanna le cumraíocht 2 × 76 bp.

anailís chainníochtaithe mRNA agus tras-scríbhneoireacht

Baineadh úsáid as bradán (v. 1.5.1) i modh mapála-bhunaithe chun cainníochtú na n-athscríbhinní a dhéanamh, agus an tras-scríbhinn tagartha matán musculus GRCm38.98. Rinne an teanga staidrimh R anailís ar na comhaid qf a d'eascair as. Baineadh úsáid as an bpacáiste tximport chun na sonraí a iompórtáil in R, agus thit na tras-scríbhinní ar ghéinte ag an bpacáiste AnnotationDbi agus ag bunachar sonraí org.Mm.eg.db. Ar deireadh, rinneamar na hanailísí staitistiúla le DESeq2. Rinneamar Anailís Róshaibhrithe (ORA) trí úsáid a bhaint as an bpacáiste ClusterProfiler chun an bunachar sonraí GO:BP a fhiosrú, agus na hanailísí staitistiúla a tháinig as, chun cosáin cheallacha athraithe a bhrath. Chun na géinte a roghnú don anailís saibhrithe shocraigh muid an tairseach log2FC go 0.5 (| log2FC|⋝ 0.5) agus an p-luach coigeartaithe go 0.{ {17}}5. Tar éis na torthaí a scagadh de réir p-luach 0.05, d'aisghabhamar 45 próiseas dírialaithe go staitistiúil i measc na 15158 a tástáladh i gcoinne bhunachar sonraí GO:BP.

Cainníochtú cytokines Luminex

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Rinneadh lucha a íobairt tar éis 2 lá de chóireáil (T2) le Feithicle, SR59230A, PD-L1, agus SR59230A + PD-L1, agus rinneadh mais meall a dhíbirt le siosúr agus homogenized ag baint úsáide as an trealamh Bith-Plex Cell lysis (BIO-RAD, California , USA) agus an gentleMACS Octo Dissociator (Miltenyi Biotec, an Ghearmáin). Rinneadh tástáil ar lísáití meall ansin le haghaidh a dtiúchan citociní trí thástálacha Bio-Plex Pro™ (BIO-RAD, California, SAM) bunaithe ar theicneolaíocht Luminex xMAP. leibhéil IFN- , TNF- , IL-2, IL-6, IL-10, GM-CSF, IL-1 , agus IL-1 (pg/ml ) a thomhas de réir threoracha an mhonaróra. Fuarthas sonraí ar an gCóras MAGPIX (Luminex, Texas, USA) agus rinneadh anailís ag baint úsáide as bogearraí Bio-Plex Manager™ (BIO-RAD, California, USA).

Anailís chitiméadrach sreafa

Rinneadh anailís cíteaiméadrachta sreafa ar chealla meall agus ar fhodhaonraí cille imdhíonacha na micri-thimpeallachta meall mar seo a leanas. Go hachomair, rinneadh siadaí a aonchineálú leis an luch trealamh díthiomsaithe meall (#130-096-730, Miltenyi Biotec) agus limficítí insíothlaithe siadaí a leithlisiú ó fhionraí iomlán na gceall ag baint úsáide as luch MicroBeads CD45 (TIL) (#130-110- 618, Miltenyi Biotec) nó CD8 (TIL) MicroBeads luch (#130-116-478, Miltenyi Biotec) tríd an Automatics Pro Separator (Miltenyi Biotec) de réir threoracha an mhonaróra. Ansin goradh cealla agus dathaíodh iad le teaglaim éagsúla caolaithe go cuí d’antasubstaintí éagsúla comhchuingeach fluairocróim (Tábla Forlíontach 1). Rinneadh anailís ar chealla dhaite ag baint úsáide as Anailíseoir MACSQuant 10 Flow Cytometer (Miltenyi Biotec®), agus próiseáladh sonraí ag baint úsáide as bogearraí Flowlogic (Miltenyi Biotec®).

Imdhíonfluaraiseacht cealla agus fíocháin

Rinneadh anailís imdhíonfluaraiseachta ar mhais meall murine mar seo a leanas. Máladh samplaí go tapa, socraíodh iad i formaildéad 4% maolánach ar feadh 24 h, agus leabaíodh pairifín. Gearradh ailt histological, 5 μm tiubh, ó shamplaí, díphairifínithe agus boil ar feadh 10 min i maolán citrate sóidiam (10 mM, pH 6.0; Bith-Optica) le haghaidh aisghabháil antigen agus imdhíon-shainithe thar oíche ag 4 céim le bunscoileanna. antasubstaintí (frith-PD-L1, ab238697, Abcam; frith- 3-AR, ab94506, Abcam; frith-CD4, 14-9766-82, eBitheolaíocht; frith-CD8, 14-0808-82, eBitheolaíocht; DBH, ab209487, Abcam). Nochtadh imoibriú imdhíonachta ag gor rannáin le antasubstaintí tánaisteacha Alexa Fluor 488- comhchuingeach IgG nó Alexa Fluor 594-IgG comhchuingeach (1:350; Jackson Laboratory). Tar éis frithstain a dhéanamh le 4,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI), fuarthas íomhánna ionadaíocha le micreascóp Olympus BX63 i dteannta le CellSens Dimension Imageaging Software leagan 1.6 (Olympus). Rinneadh measúnú ar an staining imdhíonfhluaraiseacht trí bhogearraí ImageJ (NIH, SAM) de réir mar a normalaíodh déine fluaraiseachta na próitéine inspéise go luachanna DAPI.

Buntáistí cistanche tubulosa-Antitumor

Kaplan-Meier agus anailís ar chomhghaolú géine in othair le NB

Comhghaol géine ADRB3 le géinte seicphointe imdhíonachta CD80, CTLA4, CD276, CD226, CD40LG, 4-1BBL, agus comhghaol idir dóchúlacht iomlán (OS) agus dóchúlacht marthanais saor ó imeacht (EFS) othar le NB agus leibhéil ARDB3 Rinneadh slonn mRNA ag baint úsáide as an bpróifíl slonn géine de 649 eiseamal NB a gineadh ag baint úsáide as micrea-eagair oligonucleotide 44 K. Aisghabhadh próifílí agus sonraí cliniciúla ón ardán R2: anailís ghéanómach agus léirshamhlaithe (http://r2.amc.nl), (Kocak, saincheaptha ag44kcwolf, n=649 cás). Baineadh úsáid as an gceathairíl dheireanach den dáileadh mar luach scoite slonn le haghaidh slonn géine ADRB3 ard in aghaidh íseal in anailís Kaplan-Meier.

Staitisticí

Rinneadh anailís staitistiúil trí úsáid a bhaint as GraphPad Prism (GraphPad, San Diego, CA, SAM) trí anailís aontreo nó dhá threo ar athraitheas (ANOVA), agus ina dhiaidh sin tástáil iar-hoc Bonferroni nó t-tástáil mac léinn gan péire. Maidir leis na turgnaimh in vivo, de réir staidéir roimhe seo ar an tsamhail ainmhithe céanna [12], bhí gá le 6 lucha ar a laghad in aghaidh an ghrúpa chun cumhacht 80% a ráthú. Cuirtear luachanna i láthair mar mheán ± SEM. Measadh tábhacht nuair a bhí P<0.05 and described in each figure legend. Allocation concealment was performed using a randomization procedure (http:// www.randomizer.org/).

TORTHAÍ

3-Laghdaíonn antagonism AR slonn PD-L1 i gcealla meall de lucha A/J NB

Léirigh staidéir le déanaí gur meicníocht ríthábhachtach é comharthaíocht PD-1/PD-L1 in NB chun faireachas imdhíonachta a theorannú agus go bhfuil comhghaol idir slonn PD-L1 agus ardleibhéil marcóirí siadaí [15, 16]. Agus na sonraí seo agus ár sonraí roimhe seo á gcur san áireamh a thaispeánann cumas 3-Imshuí AR chun TME inniúlacht-imdhíonachta a fháil i lucha a bhfuil meileanóma orthu [13], d’fhiontar muid an bhfuil an 3-AR ar an meall NB. d'fhéadfadh gníomhachtú freagra imdhíonachta a bheith mar thoradh ar antagonism ag brath ar rannpháirtíocht chomharthaíochta PD-L1. Laghdaigh riarachán an 3-antagonist AR, SR59230A, i múnla syngeneic murine de NB, fás siadaí go pointe níos mó ná cóireáil frith-PD-L1 antagonist mAb (PD-L1), ach níor breathnaíodh aon éifeacht sineirgisteacha nuair a cuireadh cóireáil ar lucha leis an dá dhruga (Fíor 1A, B). Chun imscrúdú a dhéanamh an raibh an éifeacht frith-meall a thug riarachán SR59230A ag brath go páirteach ar mhodhnú slonn PD-L1, rinneamar measúnú ar an leibhéal slonn PD-L1 i TME de lucha a bhfuil NB orthu. Suimiúil go leor, léirigh immunofluorescence (Fíor 1C) agus anailís blot an iarthair (Fíor 1D) ar mhais meall murine gur tháinig laghdú ar léiriú PD-L1 i TME na lucha a ndearnadh cóireáil orthu leis an antagonist 3-AR i gcomparáid le riocht feithicle. De réir mar a léirigh sonraí fairsinge litríochta, i TME, chomh maith le cealla ailse, gurb iad cealla stromal cosúil leis na cealla a thíolacann antaiginí (APCanna), MDSC, DCanna, agus macrophages, príomhfhoinsí PD-L1 [17-20], ní mór dúinn a thuilleadh. fiosraíodh cén áit sa TME, a raibh tionchar ag leibhéal slonn PD-L1 i ndiaidh 3-Imshuí AR. Léirigh measúnacht cíteafluaraiméadrach gur laghdaigh antagonism 3-AR léiriú PD-L1 i gcealla meall (Fíor 1E) agus a leibhéal léirithe i DCanna agus macrophages ag méadú (Fíor 1F, G). Níor breathnaíodh aon athruithe sa daonra MDSC (Fíor 1 H). Léiríonn na chéad torthaí seo go ndearna 3-bhlocáil AR gníomhaíocht shuntasach fhrith-mheallta i múnla singéiseach de lucha a bhfuil NB orthu agus nár chothaíodh éifeacht sineirgiste frith-mealltach mar gheall ar riar comhchéimneach antashubstaint PDL1. Díol spéise é, rinne 3-Antagonism cógaseolaíochta AR leibhéal slonn PDL1 a mhodhnú in TME, rud a thugann le tuiscint go raibh baint ag comharthaíocht PD-L1 leis an ngníomh frith-meall a thug an imshuí 3-AR.

Fíor 1 Éifeacht cóireálacha SR59230A agus PD-L1 ar fhás siadaí agus léiriú PD-L1 i lucha NB a bhfuil siadaí orthu

3- Spreagann frithghníomhaíocht AR agus riar PD-L1 TME imdhíon-imoibríoch in NB

D'fhonn imscrúdú a dhéanamh ar cé acu an raibh imoibríocht imdhíonachta in TME mar thoradh ar an slonn PD-L1 laghdaithe, a breathnaíodh i gcealla meall NB tar éis 3-Frithghníomhaíocht AR, rinneamar luacháil ar an líon perforin de réir PD-1+CD{ ar dtús. {4}} cealla i mais siadaí SR59230A-, PD-L1- nó SR59203A + PD-L1-lucha cóireáilte i gcomparáid leis an bhfeithicil (Fíor 4A, B). Ina theannta sin, léirigh measúnacht staining Ki67 treocht a léirigh méadú ar iomadú cealla T CD8+ i siadaí NB de lucha a ndearnadh cóireáil orthu leis an antagonist 3-AR nó antashubstaint PD-L1, fiú má theip air teacht go suntasach difríochtaí (Fíor 4C). Ar deireadh, léirigh tomhas cítocíní, i mais siadaí lucha cóireáilte PDL, go raibh leibhéal méadaithe cítocíní ar eolas go bhfeidhmíonn siad gníomhartha frith-meallta ar nós TNF- , IFN- , agus IL{1-, agus comhchéimneach. laghdú ar an gcítocín imdhíonachta-shochtadh IL-10. Is ionadh é, i lucha NB a bhfuil cóireáil orthu leis an antagonist 3-AR, chonaiceamar méadú de TNF- agus IL-6, agus laghdú ar leibhéil IL-10, de réir an imdhíon- stádas imoibríoch molta ag gnéithe cealla T, ach leibhéal laghdaithe de IFN- (Fig. 4D). Ní bhfuarthas aon difríochtaí suntasacha i gcítocíní eile a ndearnadh measúnú orthu (GMCSF, IL-2, IL-1 , agus IL-1 ). Léiríonn na sonraí seo i dteannta a chéile go gcuireann 3-Antagonism AR an freagra imdhíonachta óstaigh i TME na lucha a bhfuil NB orthu, ag teacht siar ar na héifeachtaí céanna a breathnaíodh tar éis riarachán antashubstainte PD-L1. Go háirithe, neartaíodh feidhmeanna cíteatocsaineacha CD{8+ le SR59230A agus PD-L1 araon. Níor tugadh faoi deara aon éifeachtaí sineirgisteacha nuair a comhriaraíodh an frithghníomhaire AR 3- leis an antashubstaint PD-L1, rud a dheimhnigh go mbraitheann an t-imoibríocht imdhíonachta a tugadh mar gheall ar 3-blockade AR, go páirteach ar a laghad, ar chomharthaíocht PD-L1 rannpháirtíocht cosáin.

Spreagann Fíor 2 SR59230A agus PD-L1 TME imdhíonachta-imoibríoch in NB

Fíor 3 Léiriú seicphointí imdhíonacha ar limficítí i TME agus TDLN tar éis 3-Frithghníomhaíocht AR agus riar PD-L1

Fíor. 4 3-Cuireann imshuíomh AR feidhmeanna CD8 i bhfeidhm agus rialaíonn sé rún cítocíní imdhíonachta in TME.

3-Déanann AR ar limficítí insíothlaithe siadaí a mhodhnú secretion IFN- agus cuireann sé isteach ar slonn PD-L1 ar chealla meall NB

Is féidir le roinnt fachtóirí a bheith mar thoradh ar léiriú PD-L1 ar chealla meall, ach i measc daoine eile, is ionann TNF- agus IFN- agus na príomh-cítocíní atá in ann leibhéil PD-L1 a mhéadú i siadaí éagsúla [23]. Chun an chomharthaíocht atá mar bhun don chroschaint 3-AR/PD-L1 inár múnla siadaí de NB a shoiléiriú tuilleadh, rinneamar measúnú in vitro ar léiriú PD-L1 ar chealla meall N2A tar éis cóireála TNF- agus IFN-. Léirigh na torthaí go raibh slonn PD-L1 uasrialaithe i gcealla NB cóireáilte ar feadh 48 h le IFN- ach ní le TNF- . Ina theannta sin, níorbh fhéidir le réamhchóireáil cealla meall N2A leis an 3-antagonist AR SR59230A aisghairm a dhéanamh ar an slonn méadaithe PDL1 a thug cóireáil IFN (Fíor 5A). Ag cur san áireamh gur aithin sonraí litríochta TILanna mar phríomhfhoinse cheallacha IFN- le linn freagairt imdhíonachta oiriúnaitheach [24] agus gur léirigh ár dtorthaí nach raibh tionchar ag 3-modhnú AR ar chealla meall N2A ar an IFN- -PD cleithiúnach -L1 abairt, smaoinigh muid an raibh modhnú 3-AR ar TILs freagrach as secretion IFN- athraithe, rud a chuir isteach ar an slonn PD-L1 ar chealla meall. Chun ár hipitéis a chruthú, rinneadh limficítí a fuarthas ó TDLNanna de lucha NB-iompair cóireáilte le feithicil nó SR59230A a leithlisiú agus a chomhshaothrú in vitro le cealla meall. Dhearbhaigh anailís imdhíon-fhluaraiseachta agus cíteiméadracht sreafa gur laghdaigh limficítí a bailíodh ó lucha a bhfuil NB cóireáilte leis an 3- antagonist AR a gcumas an abairt PD-L1 a spreagadh ar chealla N2A i gcomparáid le limficítí neamhchóireáilte (Fíor 5B, D). Ina theannta sin, dheimhnigh tomhas leibhéal IFN sna meáin chomhchultúr gur chaill limficítí a bailíodh ó lucha cóireáilte SR50230A go páirteach a gcumas IFN- a secrete nuair a bhí siad comhshaothraithe le cealla meall NB (Fíor 5C). Tá sé léirithe cheana féin go bhféadfadh 3-AR a bheith cúpláilte le próitéin Gs i roinnt fíocháin, agus mar thoradh ar a ghníomhachtú cuirtear cosán comharthaíochta cAMP/PKA i ngníomh [25]. Ag an am céanna, chruthaigh staidéir an ról ríthábhachtach atá ag an eilimint freagrúil timthriallach AMP ceangailteach (CREB) mar rialtóir tras-scríobhach dearfach ar IFN- i gcealla T [25-27]. Ag tosú leis na breathnuithe seo rinneamar measúnú ar cé acu an raibh baint ag conair chomharthaíochta cAMP/PKA/CREB leis an 3-rún IFN-spleách AR i TILanna. Thaispeáin torthaí gur laghdaigh 3-AR freasúla de CD8+ TILanna fosfarylation na bhfo-aonaid PKA/PKA agus CREB, rud a d’fhág gur laghdaíodh slonn IFN i CD8+ TILs (Fíor Forlíontach 1A , B). Dheimhnigh na torthaí seo go bhfuil 3-AR in ann an trascríobh IFN- i TILs de NB a choinneáil trí chonair chomharthaíochta cAMP/PKA/CREB a spreagadh. Ar an láimh eile, laghdaíodh an cítocín imdhíon-imdhíonach IL-10 i Treg de lucha cóireáilte le SR59230A i gcomparáid le feithicil (Fíor Fhorlíontach 1C), rud a dhearbhaigh imoibríocht imdhíonachta an NB TME tar éis 3-Cóireáil antagonist AR. de lucha NB-iompartha. Chun éifeacht roghnaíoch antagonism SR59230A ar an bhfochineál 3-AR a dhearbhú, rinneamar measúnacht chomhchultúr le limficítí a tosaíodh le siRNAs do 1-, 2- agus 3-AR subtypes. Léirigh na torthaí gur chaill limficítí tosta le haghaidh 3-AR, i measc na bhfochineálacha -AR, go páirteach a gcumas léiriú PD-L1 a aslú ar chealla meall N2A i gcomparáid le riocht rialaithe (Fíor 5E agus Fíor Forlíontach 1D). Ina theannta sin, deimhníodh léiriú próitéin an 3-AR ar limficítí murine de lucha NB le hanailís blot an iarthair ar limficítí a fuarthas ó TDLNs (Fíor Forlíontach 2A) agus imdhíonfhluaraiseacht CD4+ agus CD{{ 90}} T cealla dhaite le haghaidh 3-AR ar chodanna mais siadaí (Fíor Forlíontach 2B). Léirigh muid roimhe seo gur chuir antagonism sonrach 3- AR ar chealla meall N2A faoi SR59230A, bac ar fhás NB agus ar dhul chun cinn siadaí, trí athrú ó ghas go gnéithe difreála na gcealla meall [12]. Anseo, thug ár dtorthaí le fios go raibh éifeacht frith-meall riarachán antagonist 3-AR ag brath freisin ar an modhnú comharthaíochta 3-AR ar TILanna, rud a d'fhág go raibh athspreagadh freagairtí imdhíonachta i gcoinne siadaí dá bharr. Mar sin, chun ár dtráchtas in vivo a chomhthacú, thugamar FTY720 chun cealla T a shrianadh i TDLNanna agus chun a n-insíothlú i mais siadaí a laghdú. Is analóg de 1-fosfáit sphingosine (S1P) é FTY720, agus spreagann a riarachán inmheánú agus díghrádú an ghabhdóra S1P, rud a chuireann cosc ​​ar limficítí imeacht ó na nóid limfe [28]. Mar a glacadh leis, laghdaigh réamhchóireáil FTY720 an éifeacht frith-mheallta a tharla de bharr 3-riarachán antagonist AR (Fíor 5F–H). Chun éifeachtacht FTY720 a bhailíochtú chun srian a chur ar chealla T i TDLNanna, thomhaiseamar an uimhir cille T i TDLNanna tar éis ocht lá (T8) de chóireáil. Léirigh na torthaí gur mhéadaíodh cealla CD4+ agus CD8+ araon i TDLNanna de lucha réamhchóireála le FTY720 i gcomparáid le lucha neamhchóireáilte (feithicil) (Fíor Forlíontach 2C). De réir ár dtorthaí agus torthaí eile roimhe seo a léiríonn go bhfuil comharthaíocht S1P ríthábhachtach do mharthanas na gcealla meall NB [12, 29], bhí cóireáil le FTY720 amháin in ann fás siadaí a laghdú go suntasach (Fíor 5F–H). Anailís seicheamhaithe RNA ar mhais siadaí NB scoite amach ó fheithicil agus d'aithin lucha cóireáilte SR59230A 5607 géinte ina measc bhí 267 géinte in iúl go difreálach (DEGanna), uasrialaíodh 127 agus íosrialáil 140 i siadaí cóireáilte SR59230A (Fig. 6A). Go háirithe, bhain roinnt géinte a cuireadh in iúl go difreálach go staitistiúil le cosáin a bhain le himdhíonacht de réir bunachar sonraí GO: BP (Fíor 6 B). Thairis sin, thacaigh íosrialáil an mRNA PD-L1 (géine CD274) i meall cóireáilte SR59230A i gcomparáid le riocht feithicle agus upregulation na ngéinte éagsúla eile a bhfuil baint acu le próisis imdhíonachta (Fíor 6C) leis an gcomhghaol idir 3-AR agus an seicphointe imdhíonachta PD-L1 a breathnaíodh ag an leibhéal próitéine. Mar fhocal scoir, dheimhnigh anailís léiriú géine difreálach ar thacar sonraí poiblí (GSE14880 ó chartlann GEO) comhdhéanta de 34 othar a raibh tionchar ag NBanna orthu, gur léirigh maiseanna meall NB le léiriú íseal ADRB3 rialáil dhearfach ar fhreagraí imdhíonachta, gníomhachtú cealla T, agus éifeachtóir imdhíonachta. cosáin i gcomparáid le mais siadaí le leibhéil arda ADRB3 (Fíor 6D). Le tabhairt faoi deara, cé go ndéantar ailsí éagsúla, go scaoiltear catecholamines trí néaróin a bhaineann le hailse nó go sroicheann siad an meall trí scaipeadh fola, i NB eascraíonn leibhéil iomarcacha catecholamines agus a gcuid meitibilítí (HVA, VMA, dopamine), gné uathúil den urchóideacht seo. ó fhoinse eile. Go deimhin, mar gheall ar bhunús aisteach na gcealla NB (ó chealla difreála néarónacha báúla lochtacha an suaitheantais néaróin), is gnách go mbíonn na tumaí seo in ann catecholamines a secrete leo féin. Go deimhin, inár múnla murine NB, léirigh inmunofluorescence ar mhais meall go raibh cealla meall NB dearfach don Dopamine -Hydroxylase (DBH) (Fíor Forlíontach 3A), einsím atá freagrach as sintéis norepinephrine, beag beann ar an 3-. AR léiriú ar meall nó a fhrithbheartaíocht. Nuair a chuirtear le chéile iad, leagann na sonraí seo béim ar an ról ríthábhachtach a imríonn an chomharthaíocht -adrenergic maidir le próisis dhifriúla bhitheolaíocha a rialáil a bhaineann leis an idirghníomhú idir an córas imdhíonachta óstach agus an micri-thimpeallacht siadaí i siadaí NB. Braitheann na héifeachtaí frith-mhealla a breathnaíodh tar éis 3-Riarachán antagonist AR inár múnla singeneic murine, go páirteach ar a laghad ar mhodhnú an 3-AR arna shloinneadh ar limficítí a dhéanann insíothlú ar mhais an siadaí. Léirigh muid go háirithe gur laghdaigh imshuí roghnaíoch 3-AR ar TILanna secretion IFN-, rud a laghdaigh an slonn PD-L1 ar chealla meall NB a chothaíonn TME imdhíon-imoibríoch.

Fíor 5 3-Cosnaíonn AR ar TILanna slonn IFN- -spleách PD-L1 i gcealla meall NB. A

Tá comhghaol idir léiriú géine ADB3 agus droch-prognóis in othair NB

Thug roinnt staidéir le fios go bhfuil {{0}}AR mRNA agus/nó próitéin ró-bhrúite agus i gcásanna áirithe comhghaolú le iomadú agus claochlú neoplastic in ailsí éagsúla daonna [10, 30-32]. Dá réir sin, léirigh ár dtorthaí réamhchliniciúla a fuarthas i múnla murine singeneic de NB, gur féidir le comharthaíocht AR 3-Próisis éagsúla pro-meall a chothú ar mhaithe le fás siadaí. Dá bhrí sin, chun a thástáil an bhfuil comhghaol idir slonn géine ADRB3 agus marthanacht othar NB, rinneamar anailís Kaplan-Meier tríd an Ardán Anailíse agus Amharcléirithe Géanómaíochta R2 (http://r2.amc.nl), ag baint úsáide as bunachar sonraí Kocak lena n-áirítear faisnéis iomlán faoi shonraí cliniciúla 649 othar NB. Léirigh na torthaí go raibh baint ag léiriú géine ADRB3 le drochthorthaí in othair le NB. Go deimhin, bhí baint shuntasach ag léiriú ard na géine ADB3 le laghdú saor ó imeacht (p=3.2e-05) (Fíor 7A) agus marthanacht iomlán (p=8.4e−0.5) ( Fíor 7B) othar NB. Ina theannta sin, léirigh anailís ar chomhghaolú géine i roinnt cohóirt comhghaol dearfach idir an ADRB3 agus géinte le haghaidh seicphointí imdhíonachta coisctheacha, mar CD80, CTLA4, agus CD276, agus comhghaol diúltach le géinte le haghaidh seicphointí imdhíonachta a ghníomhaíonn an córas imdhíonachta, mar CD266, ligand CD40 (CD40LG) agus 4-1BB ligand (4-1BBL) (Fíor 7C). Tríd is tríd, léiríonn na sonraí a fuarthas an comhghaol diúltach idir léiriú géine ADRB3 agus toradh othar NB agus comhthacaíonn agus neartaíonn siad ról an 3-AR mar imreoir móilíneach atá in ann freagairtí imdhíonachta frith-meall a mhaolú trí thionchar a dhéanamh ar sheicphointe imdhíonachta iolrach. cosáin comharthaíochta.

PLÉ

Ós rud é go bhfuil a bhunús néarogenic aisteach, tá leibhéil arda meitibilítí catecholamine mar shaintréithe ar riocht meall NB [7, 33]. In obair roimhe seo, rinneamar tuairimíocht go bhféadfadh scaoileadh catecholamine in TME díriú ar chealla ailse trí -ARanna a ghníomhachtú, rud a chuirfeadh lúb ar aghaidh fáis agus urchóideachta in ailse NB. Go deimhin, léirigh sonraí turgnamhacha go gcuirtear 3-AR in iúl ar línte cille meall NB éagsúla agus bithóipsí ó othair agus go raibh tionchar suntasach ag a modhnú ar fhás siadaí i múnla murine syngeneic de NB [12]. Chomh maith leis an léiriú -ARs ar chealla meall, tá a fhios go forleathan go bhfuil -ARs suite ar dhromchla an chuid is mó de na cealla i TME, lena n-áirítear cealla imdhíonachta, agus go rialaíonn ligation catecholamines go -ARs i gcealla imdhíonachta díolúine dúchasach agus oiriúnaitheach araon. [34]. Le tabhairt faoi deara, agus faoi choinníollacha fiseolaíocha, cuireann modhnú an chórais imdhíonachta trí-adrenergic comharthaí chun cinn gnáthfhreagairt imdhíonachta, i bpróisis athraithe, d'fhéadfadh go mbeadh éifeachtaí díobhálacha ag spreagadh fadaithe SNS/catecholamines/-ARs ar chealla imdhíonachta éagsúla lena n-áirítear limficítí [35, 36 ]. Sna coinníollacha athraithe seo, cuireann spreagadh leanúnach ar chomharthaíocht adrenergic próisis paiteolaíocha chun cinn, agus i measc daoine eile, dul chun cinn ailse [37]. Ag tosú ó na breathnuithe thuasluaite, tá rún ag ár staidéar imscrúdú a dhéanamh an bhféadfadh na héifeachtaí frith-mhealla a thugann 3-Frithmheallta AR i siadaí NB, brath go páirteach ar athbheochan na himdhíonachta frith-meall agus an bhféadfadh sé seo a bheith i gceist. modhnú seicphointí imdhíonachta bealaí comharthaíochta. Tugann staidéir réamhchliniciúla le fios go léiríonn slonn PD-L1 i NB meiteastatach meicníocht ríthábhachtach chun faireachas imdhíonachta a theorannú [15], agus go leigheasann imdhíonteiripe comhcheangailte le hantasubstaintí frith-PD-L1/PD-1 agus frith-CD4 scaipeadh singeneiceach NB [ 38]. Le déanaí, rinneadh measúnú ar léiriú PD-L1 i roinnt tumaí péidiatraiceacha, agus thar aon rud eile, bhí baint ag staining PD-L1 le maireachtáil inferior i measc othar le NB [16, 39]. Ina theannta sin, léiríodh go raibh siadaí dearfacha PD-L lonnaithe sa fhaireog adrenal níos minice ná siadaí diúltacha PD-L{1-agus gur gnách go raibh meitibilítí catecholamine (NSE, VMA, agus HVA). níos airde sa ghrúpa dearfach PD-L ná sa ghrúpa diúltach PD-L [16].

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Mhol an fhianaise seo cumas na haise comharthaíochta PD-1/PD-L1 éalú imdhíonachta siadaí a rialú i NB bunscoile agus meiteastatach, áfach, níor scrúdaigh siad na meicníochtaí beachta is bun leis an PD-1/PD- Rialachán comharthaíochta L1. Chun imscrúdú a dhéanamh an bhféadfadh an modhnú 3-AR cur isteach ar slonn PD-L1 in NB, agus ar an imoibríocht imdhíonachta iarmhartach sa TME, chuireamar cóir leighis ar lucha A/J a bhí ionaclaithe leis na cealla syngenacha N2A NB, leis na 3- antagonist AR SR59230A, antashubstaint mhonaclónach PD-L1 (PD-L1), nó a gcomhcheangal. Ar an gcéad dul síos, thugamar faoi deara go raibh 3-antagonism AR in ann fás siadaí NB a laghdú agus slonn PD-L1 a laghdú i TME lucha a bhfuil NB orthu. Léirigh citoiméadracht sreafa gur léirigh an méid laghdaithe PD-L1 a breathnaíodh i mais meall na lucha cóireáilte SR59230A den chuid is mó léiriú laghdaithe cealla meall. I gcodarsnacht lom, bhí slonn PD-L1 ar DCanna agus macrophages uasrialaithe. Tá roinnt fianaise eolaíoch a shanntar do PD-L1 suite ar chealla meall agus APCanna araon an cumas chun gníomhachtú cille T a mhaolú, ag cur bac go páirteach ar imoibriú imdhíonachta éifeachtach i gcoinne an meall [40]. Mar sin féin, léirigh staidéir le déanaí, le linn glacadh antaiginí agus tras-chur i láthair antaiginí siadaí do chealla T, céim ríthábhachtach san imdhíonacht oiriúnaitheach, DCs agus macrophages upregulate PD-L1 mar sin a theorannú gníomhachtú iomarcach cealla T agus iad a chosaint ó ghníomhaíochtaí cíteatocsaineacha de. cealla T [41, 42]. Mar sin, rinneamar hipitéisiú gur dócha gur léirigh léiriú laghdaithe PD-L1 ar chealla meall agus a mhéadú comhréireach ar APCanna i mais siadaí cóireáilte SR59230A athbheochan an chórais imdhíonachta in TME. Dhearbhaigh na torthaí go raibh méadú ar líon na gceall imdhíon-imoibríoch insíothlaithe siadaí (NK, DCs, agus CD8+), agus laghdú ar chealla imdhíonachta-insíothlaithe siadaí (Treg agus MDSC). Léirigh anailís slonn ar an seicphointe imdhíonachta PD-1 ar TILanna méadú suntasach ar líon na gcealla T PD-1+CD4+ agus PD{- 1+CD{8+) i TDLN ag céim luath d'fhorbairt siadaí (T2), agus PD-1+CD8+ sa siad tar éis 8 lá (T8) de SR59230A, PD-L1, nó a gcóireáil teaglaim i gcomparáid le rialú. Tugadh treocht mhéadaitheach faoi deara freisin i líon na gcealla CD4+ T a dhaite do TIM3 nó LAG3 i siadaí SR59230A, cóireálacha PD-L1, agus a gcomhcheangal, ach níor éirigh leo tábhacht staitistiúil a bhaint amach. I gcás cealla T CD8+ daite le haghaidh TIM3 nó LAG3, thugamar faoi deara ina ionad sin go raibh éagsúlacht mhór ann. Cé gur thug roinnt sonraí litríochta le fios go bhfuil PD-1, LAG-3, agus TIM-3 a léiríonn cealla T ídithe agus mífheidhmiúil [43–45], léirigh daoine eile go bhfuil na seicphointí imdhíonachta seo, go háirithe PD -1, á n-uasrialú freisin tar éis difreáil cille T gníomhachtaithe agus éifeachtóra [46-48], agus mar sin ní léiríonn léiriú per se stádas ídithe, ach sainaithníonn na marcóirí seo an stór uathlógach siadaí-imoibríoch ag insíothlú siadaí éagsúla [46 - 49]. I gcomhaontú, dheimhnigh imscrúduithe níos doimhne inár múnla siadaí gur tharraing 3-antagonism AR, mar chóireáil leis an frith-PD-L1 mAb, feidhmeanna cíteatocsaineacha CD{80}}, mar atá léirithe ag an líon méadaithe PD. 1+CD8+ cealla daite le haghaidh perforin nó granzyme B, rud a thugann le tuiscint go bhfuil TILanna PD1+ a fhaightear i mais siadaí gníomhach go feidhmiúil. Léiríodh go bhfuil comhghaol idir insíothlú ard cealla T cíteatocsaineacha CD i meall agus prognóis dearfach in othair a bhfuil roinnt urchóideacha orthu lena n-áirítear meileanóma, ceann agus muineál, cíche, calaireicteach, ubhagán, prostatach agus ailsí eile [50]. I NB, léirigh staidéar le déanaí go raibh toradh cliniciúil níos fearr ag tumaí saibhrithe i gcealla T a insíothlú siadaí, neamhspleách ar tháscairí reatha eile a glacadh le haghaidh stáitsiú siadaí [51]. Thairis sin, léirigh torthaí le déanaí go bhfuil baint dhearfach idir láithreacht cealla DC agus NK i mais meall le insíothlú cille T agus le toradh cliniciúil dearfach othar NB [52]. Aontaíonn na fianaise chliniciúil seo go léir lenár dtorthaí réamhchliniciúla, ina raibh TME saibhrithe de chealla T NK, DC, agus CD8+, a breathnaíodh tar éis antagonism AR nó riarachán PD-L1 3-, in ann go feidhmiúil. rialú fás meall NB. Gné bhunúsach de dhúshlán chóras imdhíonachta an óstaigh i gcoinne siadaí is ea scaoileadh cytokines éagsúla i TME, ar féidir leo gníomhaíochtaí frith-meall a chothú nó a mhaolú. Deimhníodh tomhas cítocíní i siadaí, i lucha cóireáilte SR59230A- agus PD-L, riocht a aistríodh i dtreo TME imdhíonachta-imoibríoch. Mar sin féin, cé gur mhéadaigh leibhéil TNF- agus IL-6 i measc na gcítocíní frith-meall araon, thit leibhéal IFN i mais siadaí 3-AR lucha a bhí cóireáilte ag antagonist. Ag tosú leis an bhreathnóireacht seo, rinneamar hipitéisiú go bhféadfadh modhnú na 3-chomharthaíochta AR ar chealla T insíothlaithe siadaí, go háirithe ar CD4+ agus CD8+, a bheith freagrach as IFN- athraithe secretion, rud a chuir isteach ar an abairt PD-L1 ar chealla meall. Dhearbhaigh na torthaí ár hipitéis. Mar gheall ar an bhfrithghníomhaíocht roghnach 3-AR ar TILanna, bhí na cealla seo mí-éifeachtach chun an slonn PD-L1 a aslú ar chealla meall NB de bharr secretion athraithe IFN- , agus cosc ​​de facto frithsheasmhacht imdhíonachta oiriúnaitheach a bhunú. In TME, déanann IFN- freagraí imdhíonachta pro-tumorigenic agus antitumor a stiúradh, ag gníomhú mar cítocín cíteatocsaineach in éineacht le granzyme B agus perforin chun cealla meall a bhuail, ach freisin spreagann sé sintéis seicphointí imdhíonachta coisctheacha, rud a spreagann meicníochtaí imdhíonachta-sochtadh [53]. Tá ról démhódach IFN- maidir le héifeachtaí contrártha a chruthú ag brath ar mheicníochtaí casta nach dtuigtear go hiomlán go fóill, áfach, is cosúil go bhfuil méid an IFN-secreed cinntitheach maidir leis na gníomhartha a thugann an cítocín seo a shainiú [54]. Dá réir sin, tugaimid hipitéis inár múnla go raibh an méid laghdaithe IFN- a thug 3- frithghníomhaíocht AR ar TILanna i bhfabhar freagraí imdhíonachta i gcomparáid leis an riocht rialaithe, ina gcuireann nochtadh ainsealach do IFN- meicníochtaí níos mó imdhíon-bhrú i bhfeidhm. I measc na bhfochineálacha -AR, is cosúil gurb é 2-AR an ceann is mó a chuirtear in iúl ar dhromchla raon de chealla imdhíonachta. Ba chóir a thabhairt faoi deara, áfach, gurb é 3-AR, an ball deireanach a aithníodh de na -ARanna, an ceann is lú staidéar cothrom le dáta. Dá bhrí sin, chun a dheimhniú gur thug riarachán SR59230A a éifeachtaí chun bac a chur ar an bhfochineál 3-AR den chuid is mó, rinneamar imscrúdú agus dheimhnigh ar dtús an abairt próitéine AR 3- ar limficítí TDLN agus ar chealla T a insíothlaíonn siadaí. Léirigh muid slonn na próitéine 3-AR i CD insíothlaithe siadaí4+ agus CD8+, agus ansin trí 1-, 2-, agus {{ roghnach 140}}ARanna ag tosta, thacaigh muid le ról feiceálach an 3-fhochineál AR, atá suite ar limficítí, i rialú slonn PD-L1 IFN ar chealla meall NB. Le tabhairt faoi deara, léirigh sonraí fairsinge ar fhíocháin dhifriúla agus ar mhúnlaí cille, cé go bhfuil na 1- agus 2-ARs araon níos mó seans maith le feiniméan an dí-íogrú homalógach tar éis nochtadh fada do catecholamines ingenous, an {{147} }Taispeánadh nach raibh an fo-chineál AR, agus nuair, mar sin féin, i roinnt cealla, tharla an 3-dí-íogrú ARanna, ní raibh sé chomh mór sin i gcomparáid le 1- agus {2-ARs [ 55]. Déanaimid tuairimíocht ansin i gcás siadaí NB, riocht arb é is sainairíonna é nochtadh ainsealach do catecholamines, go bhféadfadh an fochineál AR 2- ar TILanna, an ceann is mó a chuirtear in iúl go fiseolaíoch, dul faoi ísrialú tar éis dí-íogrú, agus os a choinne sin tuilleann 3-AR an ról lárnach in idirghabháil a dhéanamh ar na héifeachtaí pro-meall a chothaítear le catecholamine. Chun imscrúdú a dhéanamh i ndaoine ar chlaonadh pro-tumoral an slonn AR 3-, rinneamar anailís ghéiniteach ar deireadh ar 649 othar NB ag baint úsáide as an ardán rochtana oscailte R2: Anailís Géanómaíochta agus Amharcléiriú. Comhghaolú léiriú géine ard ADRB3 leis an toradh cliniciúil is measa (marthanas foriomlán agus saor ó imeacht) na n-othar NB i gcomparáid le léiriú níos ísle; ina theannta sin, an comhghaolú géine ADRB3 dearfach le seicphointí imdhíonachta éagsúla mar CD80, CTLA4, agus B7-H3 (CD276), agus an comhghaol diúltach le seicphointí imdhíon-ghníomhachtaithe ar nós CD266, CD40LG agus 4-1 Dheimhnigh BBL an ról diúltach a imríonn 3-AR i rialú casta na himoibríochta imdhíonachta in NB. Go háirithe, comhghaolú dearfach slonn géine ADRB3 le seicphointí imdhíonachta-sochtadh, mar CD276, móilín NB-ghaolmhar a fhaightear i leaganacha neamhfhreagracha NB, a fheidhmíonn ról cosanta ó lysis NK cille-idirghabhála [56, 57], nó le CTLA4, ar léiríodh nach raibh gá leis an gcosc maidir le marú cille T antitumor a fheabhsú i NB [58], d’aibhsigh sé cumas an chomharthaíochta 3-AR meicníochtaí éagsúla a chothú ar mhaithe le héalú imdhíonachta siadaí. Is féidir linn tuairimíocht a dhéanamh go bhféadfadh an comhghaol idir léiriú géine ard ADRB3 agus léiriú méadaithe seicphointí imdhíonachta éagsúla a bheith ag brath ar 3- chumas AR na meicníochtaí sin a chothú a gcuireann a róghníomhaíocht tús le friotaíocht siadaí, amhail nochtadh ainsealach do roinnt pro. - cytokines athlastacha. Ní raibh rath i gcónaí ar staidéir luatha ar chosc ar sheicphointí in NB. Go háirithe, i samhlacha staidéir réamhchliniciúla agus i ndaoine, mhol na freagraí níos fearr a fuarthas i straitéisí teiripeacha a ghlac il-ICIs gur cur chuige frith-meall éifeachtach neamh-iomarcach é díriú ar sheicphointí imdhíonachta éagsúla i NB [58, 59]. Ansin, d’fhéadfaí gurb é an rogha theiripeach is fearr a d’fhéadfaí díriú ar bhealaí imdhíon-sochtadh éagsúla chun friotaíocht siadaí de theiripe aon-spriocdhírithe a sheachaint. Mar sin féin, tá fadhb i gcónaí ag riaradh ildhrugaí, mar gheall ar fo-iarsmaí trom agus tocsaineacht, agus níor tháinig torthaí inmhianaithe i gcónaí. Dá bhrí sin, tá gá le heolas níos doimhne ar na meicníochtaí móilíneacha a bhaineann le rialáil líonra casta an chomhpháirtí imdhíonachta den TME chun cur chuige nua imdhíon-oinceolaíochta a fhorbairt. Sa chomhthéacs seo, tugann na torthaí a cuireadh i láthair le fios go bhféadfadh díriú ar an 3-AR in NB TME cur chuige féideartha a léiriú chun dul i bhfeidhm ar bhealaí iomadúla comharthaíochta pro-meall nach bhfuil iomarcach. Go háirithe, trí dhul i bhfeidhm ar chóras imdhíonachta an óstaigh, trí dheireadh a chur leis an mbacainn a tharlódh le comhar seicphointí imdhíonachta, agus na cosáin chun maireachtáil cille meall, d'fhéadfadh an t-antagonism 3-AR straitéis a bhfuil gealladh fúthu a léiriú le, tá súil againn, go teiripeach. féidearthacht d’othair a bhfuil tionchar ag urchóideacht NB orthu. Tá gá le tuilleadh staidéir fós chun meicníochtaí breise a dhoimhniú atá mar bhunús leis an idirghníomhú casta idir an córas imdhíonachta ósta agus an comhghleacaí siadaí in NB. Mar sin féin, i bhfianaise a bhfuil tugtha faoi deara againn, ní mór an staidéar ar chomharthaíocht -adrenergic i TME siadaí NB a chur san áireamh.

Fíor 6 Comhthacaíonn anailísí trascriptomacha ar mhais siadaí NB ról feiceálach 3-AR maidir le tionchar a imirt ar phróisis a bhaineann le himdhíonacht

Fíor 7 Anailís marthanais Kaplan-Meier agus seicphointí imdhíonachta comhghaol le slonn géine ADRB3 in othair NB.

TAGAIRTÍ

1. Cheung NK, Dyer MA. Neuroblastoma: bitheolaíocht forbraíochta, géanóm ailse, agus imdhíonteiripe. Ailse Nat Rev. 2013; 13:397–411.

2. Matthay KK, Maris JM, Gudrun S, Nakagawara A, Mackal CL, Diller L, et al. Neuroblastoma. Nat Rev Dis Prim. 2016; 2: 16078.

3. Darvin P, Toor SM, Nair SN, Elkord E. Coscairí seicphointe imdhíonachta: dul chun cinn le déanaí agus bithmharcóirí féideartha. Exp Mol Med. 2018; 50:1–11.

4. Pardoll DM. Imshuí seicphointí imdhíonachta in imdhíonteiripe ailse. Ailse Nat Rev. 2012; 12:252–64.

5. Zou W, Wolchok JD, Chen L. PD-L1 (B7-H1) agus PD-1 imshuí cosáin le haghaidh teiripe ailse: meicníochtaí, bithmharcóirí freagartha, agus teaglaim. Sci Transl Med. 2016; 8:328rv4.

6. Cole SW, Sood AK. Conairí móilíneacha: comharthaíocht béite-adrenergic in ailse. Ailse Chlin Res. 2012; 18:1201–6.

7. Strenger V, Kerlb R, Dornbusch HJ, Ladenstein R, Ambros PF, Ambros IM, et al. Tionchar diagnóiseach agus prognóiseach catecholamines urinary in othair neuroblastoma. Ailse Fola Pediatra. 2007; 48:504–9.

8. Huang XE, Hamajima N, Saito T, Matsuo K, Mizutani M, Iwata H, et al. D’fhéadfadh baint a bheith ag ilmorphisms géine receptor adrenergic béite agus so-ghabhálacht i leith ailse chíche. Ailse Cíche Res. 2001; 3:264–9.

9. Babol K, Przybylowska K, Lukaszek M, Pertynski T, Blasiak J. Comhlachas idir polymorphism Trp64Arg sa ghéin receptor adrenergic béite agus ailse endometrial agus murtall. J Cait Clin Ailse Res. 2004; 23:669–74.

10. Perrone MG, Notarnicola M, Caruso MG, Tutino V, Scilimati A. Uasrialáil béite3-receptor adrenergic mRNA in ailse drólainne daonna: réamhstaidéar. Oinceolaíocht. 2008; 75:224–9.

11. Magnon C, Halla SJ, Lín J, Xue X, Gerber L, Freedland SJ, et al. Cuireann forbairt nerve uathrialach le dul chun cinn ailse próstatach. Eolaíocht. 2013; 341: 1236361.

12. Bruno G, Cencetti F, Pini A, Tondo A, Cuzzubbo D, Fontana F, et al. Laghdaíonn imshuí adrenoreceptor beta3- fás siadaí agus méadaítear difreáil néaránach i néarblastoma trí mhodhnú SK2/S1P2. Oncogene. 2020; 39: 368-84.

13. Calvani M, Bruno G, Dal Monte M, Nassini R, Fontana F, Casini A, et al. béite3 -Adrenoceptor mar oibreán imdhíon-shochtaithe féideartha i meileanóma. Br J Pharm. 2019; 176: 2509–24.

14. Dal Monte M, Casini G, Filippi L, Nicchia MG, Svelto M, Bagnoli P. Rannpháirtíocht fheidhmiúil na ngabhdóirí béite3-adrenergic i bhfás meileanóma agus soithíoch. J Mol Med. 2013; 91:1407–19.

15. Dondero A, Pastorino F, Della Chiesa M, Corrias MV, Morandi F, Pistoia V, et al. Léiriú PDL1 i neuroblastoma méadastatach mar mheicníocht bhreise chun faireachas imdhíonachta a theorannú. Oncoimdhíoneolaíocht. 2016; 5:e1064578.

16. Zuo S, Sho M, Sawai T, Kanehiro H, Maeda K, Yoshida M, et al. Ról féideartha an abairt PD-L1 agus limficítí meall-insíothlaithe ar neuroblastoma. Pediatra Surg Int. 2020; 36: 137-43.

17. Keir ME, Butte MJ, Feeman GJ, Sharpe AH. PD-1 agus a ligands i lamháltas agus imdhíonacht. Annu Rev Immunol. 2008; 26:677–704.

18. Curiel TJ, Wei S, Dong H, Alvarez X, Cheng P, Mottram P, et al. Feabhsaíonn imshuí B7-H1 imdhíonacht fhrith-tumóra dendritic dendritic mialóideach trí mheán na cille. Nat Med. 2003; 9:562–7.

19. Wu K, Kryczek I, Cheng L, Zou W, Welling TH. Déanann idirghníomhaíochtaí B7-H1/bás ríomhchláraithe-1 cosc ​​cealla Kupffer de chealla T CD i gcarcanóma hepatocellular daonna. Ailse Res. 2009; 69:8067–75.

20. Kuang DM, Zhao Q, Peng C, Xu J, Zhang JP, Wu C, et al. Cothaíonn monocytes gníomhachtaithe i stroma peritumoral carcinoma hepatocellular pribhléid imdhíonachta agus dul chun cinn galair trí PD-L1. J Cait Med. 2009; 206: 1327-37.

21. Rotte A, Jin JY, Lemaire V. Forbhreathnú meicniúil ar sheicphointí imdhíonachta chun tacú le dearadh réasúnach a gcuid teaglaim in imdhíonteiripe ailse. Ann Oncol. 2018; 29:71–83.

22. Dammeijer F, van Gulijk M, Mulder EE, Lukkes M, Klaase L, van den Bosch T, et al. Cuireann an seicphointe PD-1/PD-L1 srian le himdhíonacht T-chealla i nóid limfeacha a dhraenálann siadaí. Cill Ailse. 2020; 38:685–700. e8.

23. Cha JH, Chan LC, Li CW, Hsu JL, Hung MC. Meicníochtaí a rialaíonn slonn PD-L1 in ailse. Cill Mol. 2019; 76:359–70.

24. Burke JD, HA Óg. IFN- : cítocín ag an am ceart, san áit cheart. Semin Immunol. 2019; 43: 101280.

25. Schena G, Caplan MJ. Gach rud a raibh tú i gcónaí ag iarraidh a fháil amach faoi 3-AR* (* ach bhí eagla ort fiafraí). Cealla. 2019; 8:357.

26. Liu Y, Guo YL, Zhou SJ, Liu F, Du FJ, Zheng XJ, et al. Is rialtóir trascríobh dearfach é CREB ar gamma interferon in ionfhabhtuithe eitinn folaigh ach nach bhfuil gníomhach. Clin ad Vaccine Immunol. 2010; 17:1377–80.

27. Samten B, Townsend JC, Weis SE, Bhoumik A, Klucar P, Shams H, et al. Rialaíonn fachtóirí trascríobh CREB, ATF, agus AP-1 an rún IFN-gáma ag cealla T daonna mar fhreagra ar antaigin mióbaictéarach. J Imdhíon. 2008; 181:2056–64.

28. Matloubian M, Lo CG, Cinamon G, Lesneski MJ, Xu Y, Brinkmann V, et al. Tá bealach amach lymphocyte ón thymus agus ó na horgáin linfóideach forimeallacha ag brath ar receptor S1P 1. Nádúr. 2004; 427:355-60.

29. Cuireann Li MH, Hla T, Ferrer F. FTY720 bac ar fhás siadaí agus feabhsaítear éifeacht shochtadh siadaí an topotecan i neuroblastoma trí chur isteach ar an gcosán comharthaíochta sphingolipid. Ailse Fola Pediatra. 2013; 60:1418–23.

30. Siosalach KM, Chang KW, Truong MT, Kwok S, West RB, Heerema-McKenney AE. léiriú receptor beta-adrenergic i siadaí soithíoch. Mod Pathol. 2012; 25: 1446-51.

31. Montoya A, Amaya CN, Belmont A, Diab N, Trevino R, Villanueva G, et al. Tá baint ag úsáid béite-bhactóirí neamhroghnacha le hinnéacsanna iomadaithe siadaí laghdaithe in ailse chíche luathchéime. Oncotarget. 2017; 8:6446–60.

32. Báisteach SL, Amaya CN, Bryan BA. Cuirtear gabhdóirí béite-adrenergic in iúl thar ailsí éagsúla. Oinceolaíocht. 2017; 4:95–105.

33. Verly IR, van Kuilenburg ABP, Abeling NGGM, Goorden SMI, Fiocco M, Vaz FM, et al. Próifílí catecholamines ag diagnóis: Íogaireacht dhiagnóiseach mhéadaithe agus comhghaol le gnéithe bitheolaíocha agus cliniciúla in othair neuroblastoma. Eur J Ailse. 2017; 72:235–43.

34. Eng JWL, Kokolus KM, Reed CB, Hylander BL, MA WW, Repasky, et al. Micrea-thimpeallacht meall neirbhíseach: tionchar strus adrenergic ar chealla ailse, cosc ​​imdhíonachta, agus freagairt imdhíonteiripeach. Imdhíonacht Imdhíonachta Ailse. 2014; 63:1115–28.

35. Dhabhar FS, McEwen BS. Feabhsaítear géarstrus agus cuireann strus ainsealach díolúine i gceall-idirghabhála in vivo faoi chois: ról féideartha do gháinneáil leukocyte. Imdhíon Imdhíonachta Inchinne. 1997; 11:286–306.

36. Dhabhar FS. Méadú ar fheidhm imdhíonachta de bharr strus - ról hormóin struis, gáinneáil leukocyte, agus cítocíní. Imdhíon Imdhíonachta Inchinne. 2002; 16:785–98.

37. Qiao G, Chen M, Bucsek MJ, Repasky EA, Hylander BL. Comharthaíocht adrenergic: seicphointe spriocdhírithe a chuireann srian le forbairt na freagartha imdhíonachta frith-tumor. Imdhíonacht Tosaigh. 2018; 9:164.

38. Rigo V, Emionite L, Daga A, Astigiano S, Corrias MV, Quintarelli C, et al. Déanann imdhíonteiripe comhcheangailte le hantasubstaintí frith-PDL-1/PD-1 agus frith-CD4 leigheas ar néarblastoma scaipthe singeneic. Ionadaí Sci. 2017; 7: 14049.

39. Majzner RG, Simon JS, Grosso JF, Martinez D, Pawel BR, Santi M, et al. Measúnú ar léiriú cláraithe bás-ligand 1 agus cealla imdhíonachta a bhaineann le meall i bhfíocháin ailse péidiatraiceach. Ailse. 2017; 123:3807–15.

40. Gibbons Johnson RM, Dong H. Léiriú feidhmeach ligand bás ríomhchláraithe 1 (B7-H1) ag cealla imdhíonachta agus cealla siadaí. Imdhíonacht Tosaigh. 2017; 8:961.

41. Peng Q, Qiu X, Zhang Z, Zhang S, Zhang Y, Liang Y, et al. Maolaíonn PD-L1 ar chealla dendritic gníomhachtú cille T agus rialaíonn sé freagairt ar imshuí seicphointí imdhíonachta. Cumann Nat. 2020; 11:4835.

42. Singhal S, Stadanlick J, Annunziata MJ, Rao AS, Bhojnagarwala PS, O'Brien S, et al. Monocytes/macrophages a bhaineann le siadaí daonna agus a rialáil ar fhreagraí cealla T in ailse scamhóg luathchéime. Sci Transl Med. 2019; 11:eaat1500.

43. Blackburn SD, Shin H, Haining WN, Zou T, Workman CJ, Polley A, et al. Comhrialú ídithe cille T CD8+ ag gabhdóirí coisctheacha iolracha le linn ionfhabhtú víreasach ainsealach. Nat Immunol. 2009; 10:29–37.

44. Jin HT, Anderson AC, Tan WG, West EE, Ha SJ, Araki K, et al. Comhoibriú idir Tim-3 agus PD-1 in ídiú T-chealla CD8 le linn ionfhabhtú víreasach ainsealach. Proc Natl Acad Sci USA. 2010; 107: 14733–8.

45. Sakuishi K, Apetoh L, Sullivan JM, Blazar BR, Kuchroo VK, Anderson AC. Díriú ar bhealaí Tim-3 agus PD-1 chun ídiú T chealla T a aisiompú agus imdhíonacht frith-meall a athbhunú. J Cait Med. 2010; 207: 2187-94.

46. ​​Agata Y, Kawasaki A, Nishimura H, Ishida Y, Tsubata T, Yagita H, et al. Léiriú antaigin PD-1 ar dhromchla limficítí luiche spreagtha T agus B. Int Imdhíon. 1996; 8:765–72.

47. Vabhakar R, Juan G, Traganos F, Darzynkiewicz Z, Finger LR. Léiriú de ghéin báis ríomhchláraithe an duine i T-limficítí de bharr gníomhachtaithe. Res cille Cait. 1997; 232:25–8.

48. Freeman GJ, Long AJ, Iwai Y, Bourque K, Chernova T, Nishimura H, et al. Bíonn rialáil dhiúltach ar ghníomhachtú limficítí mar thoradh ar rannpháirtíocht an ghabhdóra imdhíonta PD-1 ag ball teaghlaigh núíosach B7. J Cait Med. 2000; 192: 1027-34.

49. Gros A, Robbins PF, Yao X, Li YF, Turcotte S, Tran E, et al. Aithníonn PD-1 stór siadaí-imoibríoch CD8(+) a bhaineann go sonrach leis an othar a insíothlaíonn siadaí daonna. J Clin Infheistiú. 2014; 124: 2246-59.

50. Galon J, Costais A, Sanchez-Cabo F, Kirilovsky A, Mlecnik B, Lagorce-Pagès C, et al. Déantar torthaí cliniciúla a thuar le cineál, dlús agus suíomh na gceall imdhíonachta laistigh de shúmaí calaireicteach daonna. Eolaíocht. 2006; 313: 1960–4.

51. Mina M, Boldrini R, Citti A, an Rómáin P, D'Alicandro V, De Ioris M, et al. Feabhsaíonn limficítí T a insíothlaíonn meall torthaí cliniciúla ar neuroblastoma atá frithsheasmhach in aghaidh teiripe. Oncoimdhíoneolaíocht. 2015; 4:e1019981.

52. Melaiu O, Chierici M, Lucarini V, Jurman G, Conti LA, De Vito R, et al. Déanann sínithe cealla agus géine na gcealla dendritic insíothlaithe siadaí agus na gcealla marfach nádúrtha prognóis neuroblastoma a thuar. Cumann Nat. 2020; 11: 5992.

53. Jorgovanovic D, Amhrán M, Wang L, Zhang Y. Róil IFN-gáma i ndul chun cinn agus aischéimniú siadaí: athbhreithniú. Biomark Res. 2020; 8:49.

54. Zhang J. Ceann agus Yang idirghníomhú IFN-gáma i athlasadh agus galar autoimmune. J Clin Infheistiú. 2007; 117:871–3.

55. Okeke K, Angers S, Bouvier M, Michel MC. Dí-íogrú de chuid adrenoceptors béite3 -de bharr agonist: cén áit, cathain, agus conas? Br J Pharm. 2019; 176: 2539-58.

56. Castriconi R, Dondero A, Augugliaro R, Cantoni C, Carnemolla B, Sementa AR, et al. Aithint 4Ig-B7-H3 mar mhóilín a bhaineann le neuroblastoma a fheidhmíonn ról cosanta ó lysis NK trí mheán na cille. Proc Natl Acad Sci USA. 2004; 101: 12640–5.