Teibí

Cistanche tubulosa(Schenk) Tá Wight, luibh lómhar homalógach bia-leighis ón teaghlach Orobanchaceae, á saothrú go forleathan i ndeisceart Xinjiang na Síne. A phríomh-chomhábhair gliocóisídí feinileatánóideach bithghníomhacha,echinacosideagusaicteóis (verbascoside), gníomhaíochtaí cógaseolaíochta iolracha a sheachadadh lena n-áirítear frith-ocsaídiú, frith-athlasadh agus rialáil imdhíonachta. Is minic go mbíonn caillteanais mhóra ar na croí-chomhdhúile gníomhacha sin de bharr nósanna imeachta próiseála traidisiúnta neamhchaighdeánaithe, rud a chuireann srian le cur i bhfeidhm íocshláinte agus feidhmiúil bia.Cistanche tubulosapíosaí decoction. Bhí sé mar aidhm ag an taighde seo paraiméadair phróiseála nua-aimseartha a bharrfheabhsú le haghaidh úrCistanche tubulosaslices chun aisghabháil acteoside agus echinacoside a uasmhéadú, agus soiléiriú breise a dhéanamh ar an mbithghníomhaíocht frith-ocsaídiúcháin-strus agus frith-athlastach chomh maith le meicníocht mhóilíneach bhunúsach de phíosaí dícoction arna phróiseáil go barrmhaith ag an leibhéal ceallacha.

Rinneadh turgnaimh aonfhachtóir chun raonta cuí a scagadh le haghaidh tiús slisne, fad galúcháin agus teocht an oighinn-thriomú. Glacadh le modheolaíocht dromchla freagartha-Bosca-Behnken trí-fhachtóir trí-fhachtóir chun samhlacha idirghníomhaíochta ilfhachtóirí a bhunú, ag baint úsáide as ábhar acteoside agus éiceachóisíd mar tháscairí dé-mheastóireachta. Ina dhiaidh sin, tógadh samhail cille macrophage luch RAW264.7-spreagtha lipopolysaccharide (LPS) chun insamhail a dhéanamh ar sárocsaídiú lipid agus damáiste géar-athlastach. Cuireadh sraith de thástálacha bithcheimiceacha lena n-áirítear MTT, braite fluaraiseachta ROS, ELISA agus blot an Iarthair i bhfeidhm chun cumas frith-ocsaídiúcháin-strus a mheas agus chun bealaí aistrithe comhartha a iniúchadh.

De réir torthaí turgnamhacha, socraíodh na paraiméadair phróiseála is fearr mar thiús slice de 0.6 cm, cóireáil gaile ar feadh 6 nóiméad, agus an teocht a thriomú socraithe go 57 céim. Faoin gcoinníoll próiseála praiticiúil seo, shroich inneachar tomhaiste an aicteóisíd agus an echinacoside 7.25 % agus 31.62 % faoi seach, rud a léiríonn comhsheasmhacht maith le luachanna réamhaisnéise teoiriciúla. Léirigh measúnachtaí cille-bhunaithe a phróiseáiltear go barrmhaithCistanche tubulosalaghdaigh eastóscáin decoction-píosa go suntasach na tiúchain ocsaíd nítreach (NO) agus malondaildéad (MDA) i macrophages RAW264.7 a ndearnadh dúshlán LPS orthu. Idir an dá linn, d'ardaigh sé gníomhaíochtaí einsímí frithocsaídeacha intracellular superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), lactate dehydrogenase (LDH), mar aon le hábhar méadaithe glutathione (GSH). Cuireadh leibhéil secretion idirghabhálaithe pro-athlastacha lena n-áirítear TNF- , IL-1 agus IL-6 faoi chois freisin ar bhealach dáileog-spleách. Dheimhnigh braite blot an Iarthair é sinCistanche tubulosachuir eastóscáin srian ar fhosfaralú iomarcach príomhphróitéiní laistigh de chásanna comharthaíochta p38/AKT/JNK/NF-κB.

Go hachomair, feabhsaíonn an prótacal próiseála nua-aimseartha optamaithe seo go héifeachtach táirgeacht gliocóisídí feinileatánóideach tréith (acteoside agus echinacoside) iCistanche tubulosapíosaí decoction. Feidhmíonn ábhar luibhe próiseáilte éifeachtaí suntasacha frith-ocsaídiúcháin-strus agus frith-athlastacha i múnla díobhála macrophage spreagtha ag LPS, a bhfuil a mheicníocht cógaseolaíochta réadaithe go páirteach trí róghníomhaíocht a chosc ar ais comharthaíochta athlastacha p38/AKT/JNK/NF-κB. Soláthraíonn an obair seo paraiméadair theicniúla iontaofa le haghaidh déantúsaíocht thionsclaíoch chaighdeánaithe agus soláthraíonn sí tacaíocht thurgnamhach chun bia feidhme frith-ocsaídeach a fhorbairt a dhíorthaítear óCistanche tubulosa.

Eochairfhocail: Cistanche tubulosa; teicneolaíocht próiseála píosa decoction; aicteóis; echinacoside; strus frith-ocsaídiúcháin; RAW264.7 macraphage; cosán comharthaíochta p38/AKT/JNK/NF-κB

1. Réamhrá

Cistanche tubulosa(Schenk) Baineann Wight leis an teaghlach Orobanchaceae, agus is é a ghais scaly méithe an chuid oifigiúil míochaine. Tá an planda íocshláinte fásaigh seo curtha den chuid is mó i ndeisceart Xinjiang arid, an tSín. I gcleachtas traidisiúnta na Síne luibhe,Cistanche tubulosafeidhmíonn sé mar luibh tonach clasaiceach le feidhmeanna teiripeacha doiciméadaithe de tonifying duáin-yang, athlíonadh bunúsach-fola, agus gluaiseacht bputóg suaimhneach. Go cliniciúil, cuirtear i bhfeidhm é chun tinneas-laige luamhán agus glúine a mhaolú, neamhthorthúlacht de bharr easnamh duánach, agus constipation de bharr triomacht stéigeach 维普期刊.

Seasann gliocóisídí feinileatánóideach do na marcóirí bithghníomhacha is tábhachtaí deCistanche tubulosa. Sonraíonn Pharmacopoeia na Síne nár cheart go mbeadh an t-ábhar iomlán echinacoside móide acteoside níos lú ná 1.50 % i gcás ábhar míochaine cáilithe. Mar sin féin, déantúsaíocht príomhshrutha reatha naCistanche tubulosaLeanann píosaí decoction den chuid is mó de na sreafaí oibre láimhe ársa den chuid is mó: luibh úr amh a mhothú, a thaisiú go críochnúil, slisniú agus triomú nádúrtha nó próiseáil gaileadh fíona. Tá sonraíochtaí teicniúla cainníochtúla beachta in easnamh ar na cineálacha cur chuige traidisiúnta seo. Is minic go mbíonn díghrádú mór ar an gcomhábhar gníomhach le linn próiseála mar thoradh ar éagobhsaíocht theirmeach gliocóisídí feanileatánón, rud a íslíonn cáilíocht an táirge deiridh agus a chuireann srian le táirgeadh ardcháilíochta ar scála mór. Faoi láthair, ní dhéanann ach taighde teoranta ag an am céanna leas iomlán a bhaint as próiseáil-teicneolaíocht agus bailíochtú gníomhaíochta bitheolaíche; ní aimsíonn formhór na staidéar ach inneachar na gcomhábhar ceimiceach gan fíorú feidhme ceallacha, rud a chruthaíonn bearnaí do chlaochlú tionsclaíoch...

Feidhmíonn strus ocsaídiúcháin mar chroí-thruicear paiteolaíoch le haghaidh galair athlastacha meitibileach agus ainsealacha iolracha. Cuireann carnadh ró-imoibríoch-ocsaigin-speicis (ROS) isteach ar homeostasis redox, ag spreagadh tuilleadh róghníomhaithe macrophage agus scaoileadh ollmhór pro-inflammatory-cytokine, rud a chruthaíonn timthriall fí idir ocsaídiú agus athlasadh. Tá sé cruthaithe ag imscrúduithe cógaseolaíochta atá ann cheana féin go bhfuilCistancheTá airíonna frithocsaídeacha agus frith-athlastacha ag gliocóisídí feinileatánóideach de bhunadh. Léirigh turgnaimh ainmhithe roimhe seo go bhfuilCistanche tubulosamhaolaigh gliocóisídí iomlána díobháil hepatic i múnlaí creimirí sepsis trí chomharthaíocht frithocsaídeach Nrf2/HO-1 a ghníomhachtú. Comhpháirteanna lignan-glycoside scoite óCistanche tubulosad’fhéadfadh sé freagairtí athlastacha a spreag LPS a mhaolú trí chonair PI3K/AKT a mhodhnú i macrophages RAW264.7. Mar sin féin, ní dhearnadh meastóireacht chórasach ar cibé acu an gcoimeádtar bithghníomhaíocht struis fhéideartha in aghaidh ocsaídiúcháin agus a mhonaraítear faoi choinníollacha próiseála nua-optamaithe. Tá gá le taiscéalaíocht níos doimhne fós ar an meicníocht rialála móilíneach nithiúil.

Is samhail damáiste athlasadh-ocsaídiúcháin in-vitro a nglactar leis go maith é an macrophage RAW264.7 LPS-spreagtha, a nglactar go forleathan chun éifeachtaí frith-ocsaídeacha agus frith-athlastacha an táirge nádúrtha a mheasúnú. Sa staidéar seo, déanaimid scagadh aonfhachtóra ar dtús agus leas iomlán a bhaint as dromchla freagartha Box-Behnken ina dhiaidh sin chun paraiméadair theicniúla slisnithe-gaile-thriomú caighdeánaithe a fháil a dhíríonn ar ard-táirgeacht aicteóisíd agus éicéatóisíde. Tar éis táirgí decoction-píosa optamaithe a fháil, ullmhaímid sleachta luibhe agus glacaimid múnla díobhála ceallacha RAW264.7 spreagtha ag LPS. Úsáidtear ardáin turgnamhacha iolracha lena n-áirítear tomhas ocsaídiúcháin-strus-bithcheimiceach-marcóir, cainníochtú cítocín ELISA agus anailís ar chonair an Iarthair chun éifeachtúlacht struis frith-ocsaídiúcháin agus meicníocht aistrithe comhartha a shoiléiriú. Seachadann an taighde seo paraiméadair phróisis phraiticiúla do tháirgeadh ar scála píolótach ar ardchaighdeánCistanche tubulosapíosaí decoction le gníomhaíocht frith-ocsaídiúcháin-strus cobhsaí, agus leagann sé an bonn turgnamhach d'fhorbairt ina dhiaidh sin bia feidhme agus táirgí forlíonta chothaithe a fhaightear ó XinjiangCistanche tubulosaacmhainní.

2. Ábhair agus Modhanna

2.1 Amhábhair, Imoibrithe agus Uirlisí

ÚrCistanche tubulosabaineadh gais méithe san fhómhar ó Hotan, Réigiún Uathrialach Xinjiang Uyghur, an tSín. Ceannaíodh líne chill leoicéime monaicíte-macrophage luch RAW264.7 ó Procell Life Science & Technology Co., Ltd (Wuhan, an tSín). Sholáthair Merck (An Ghearmáin) aicéataitrile agus meatánól de ghrád crómatagrafach. Fuarthas substaintí caighdeánacha tagartha echinacoside agus acteoside (íonacht Níos mó ná nó cothrom le 98 %) ó Beijing North Weiye Institiúid Taighde Teicneolaíochta Méadreolaíochta. Ceannaíodh sulfocsaíd dimethyl (DMSO) ó Sigma-VETEC (SAM). Ba tháirgí de chuid Thermo Fisher Scientific (SAM). Ceannaíodh séiream bó féatais (FBS) ó BI (Iosrael). Tháinig tuaslagán antasubstainte dúbailte peinicillin-streptomycin ó HyClone (SAM). Fuarthas feisteáin mheasúnachta tráchtála do NO, MDA, SOD, CAT, GSH ó Beyotime Biotechnology (Shanghai, an tSín). Trealamh braite LDH agus lipopolysaccharide (LPS,E. coliFuarthas 055:B5) ó Solarbio (Beijing, an tSín).

I measc na bpríomhionstraimí saotharlainne bhí córas crómatagrafaíocht leachta ardfheidhmíochta Shimadzu (HPLC), evaporator rothlach LabTech, pulverizer Luibh Síneach ardluais de chineál swing, oigheann triomú teirmeastatach, trealamh pota gaile, léitheoir micreaphláta ilmhód BioTek SYNERGY-H1, FA1204N cothromaíocht anailíse leictreonach, CF154N, reifreoir anailíse leictreonach CF152 Comh-aireachta bithshábháilteachta BSC-1300IIA2 agus micreascóp optúil inbhéartaithe BDS200-PH.

2.2 Turgnaimh Phróiseála Aonfhachtóra

ÚrCistanche tubulosagearrtha gais méithe i slisní de thiús éagsúla (0.2 cm, 0.4 cm, 0.6 cm, 0.8 cm, 1.0 cm, 1.2 cm). Steamed slices ar feadh tréimhsí éagsúla (3 min, 6 min, 9 min, 12 min, 15 min, 18 min, 21 min). Ina dhiaidh sin triomaíodh ábhair faoi ghrádáin teochta éagsúla (comhthimpeallach 25 céim, 40 céim, 50 céim, 60 céim, 70 céim, 80 céim). Rinneadh samplaí de phíosaí decoction lán-triomaithe a smidiríní agus a chriathar trí criathar 40-mogalra le haghaidh cainníochtú comhpháirte HPLC ina dhiaidh sin.

2.3 Cinneadh ar Ábhar Acteoside agus Echinacoside

Ullmhúchán réiteach samplach: Meáigh 1.0 g de phúdar decoction-píosa smidiríní go cruinn isteach i bhfleascán cónúil stoptha. Cuir isteach tuaslagán meatánóil 100 ml 50 % go beacht. Déan maos 30-nóiméad agus eastóscadh ultrasonaic 40 nóiméad ina dhiaidh sin. Tar éis fuarú síos, athlíon meáchain caillteanas tuaslagóir le 50 % meatánóil, measc go cothrom agus ceadaigh socrú statach. Scagadh Supernatant trí membrane microporous 0.22 μm le haghaidh instealladh HPLC.

Ullmhúchán réitigh-caighdeánaigh thagartha: Meáigh go cruinn cainníocht iomchuí de shubstaintí tagartha aicteóisíd agus éicéatóisíde, tuaslagtha le meatánól 50 % taobh istigh de fhleascáin toirtmhéadracha, ullmhaigh tuaslagáin chaighdeánacha sraitheach-ghrádán, scagaigí le scaglann 0.22 μm.

Socrú crómatagrafach: colún anailíseach COSMOSIL C₁₈; córas céime soghluaiste: céim shoghluaiste A: tuaslagán uiscí d'aigéad fosfarach 0.1 %; soghluaiste-chéim B: aicéataitrile. Socraíodh tonnfhad braite mar 330 nm; teocht colún 35 céim; ráta sreafa 1 mL/nóim. Cuireadh modh caighdeánach seachtrach i bhfeidhm chun ríomh cainníochtúil a dhéanamh ar inneachar aicteóisíd agus éiceachóisíde. Scór meastóireachta cuimsitheach=(ábhar echinacoside × 50 %) + (ábhar acteóisíd × 50 %). D'fheidhmigh scóir chuimsitheacha mar tháscaire measúnaithe ilchodach maidir le feidhmíocht riocht próiseála.

2.4 Dearadh Turgnamhach Freagartha Bosca-Behnken-Dromchla

Bunaithe ar thorthaí turgnamhacha aonfhachtóra, úsáideadh bogearraí Design-Expert 13.0 chun socrú turgnamhach trí-fhachtóir trí-fhachtóir Box-Behnken a chur i bhfeidhm. Roghnaíodh tiús slice (X₁, cm), am cóireála gaile (X₂, min), teocht a thriomú (X₃, céim ) mar athróga neamhspleácha. Luachanna freagartha a bhí in ábhar aicteóisíd (Y₁, %) agus ábhar echinacoside (Y₂, %). Rinneadh seacht ngrúpa déag de thurgnaimh. Roghnaíodh leibhéal nialais do gach fachtóir de réir na bparaiméadar optamach a fuarthas i dtástálacha aonfhachtóir. Tar éis trialacha dromchla freagartha a chríochnú, críochnaíodh anailís athraitheas múnla, breacadh dromchla freagartha 3D agus réamh-mheas riochtaí. Rinneadh turgnaimh fíoraithe praiticiúla tar éis paraiméadair thuartha teoiriciúil a choigeartú go luachanna táirgeachta iarbhír inoibrithe.

2.5 Cultúir na gCealla agus Ullmhúchán Samplach

Monaraíodh amhábhar píosa maisithe faoi choinníollacha próiseála optamaithe. Baineadh púdar luibhe tar éis an phrótacail ullmhúcháin sampla thuasluaite, comhchruinnithe trí ghalú rothlacha agus trí fholús-thriomú chun púdar eastósctha soladach a fháil. Ullmhaíodh tuaslagán stoic trí phúdar eastósctha a thuaslagadh in DMSO, arna chaolú tuilleadh le meán DMEM iomlán (ina bhfuil 10 % FBS agus 1 % peinicillin-streiptimícin) le haghaidh turgnaimh cheallacha; rialaíodh tiúchan oibre deiridh DMSO faoi 0.1 % (v/v). Saothraíodh macrophages RAW264.7 i meán iomlán DMEM faoi 37 céim , 5 % CO₂ timpeallacht ghorlainne taisithe.

2.6 Measúnú Cíteatocsaineachta MTT

Síolaíodh cealla RAW264.7 ar mhicreaphlátaí 96-tobar ag dlús cille de 8 × 10⁴ cealla / ml. I measc na ngrúpaí turgnamhacha bhí grúpa rialaithe tuaslagóirí (0.1 % meán DMSO), grúpa múnla LPS (tiúchan deiridh LPS 1 ug/mL), agus iolrachCistanche tubulosagrúpaí tiúchana eastóscáin (3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 ug/mL). Tar éis réamh-goir 2-h le sampla luibhe, forlíontar LPS (tiúchan deiridh 1 ug/mL) do gach grúpa seachas grúpa rialaithe tuaslagóra. Leanadh den gor ar feadh 24 u. Ansin cuireadh imoibrí MTT (5 mg/mL) leis agus gor é ar feadh 4 h. Déan an sásar a scriosadh, cuir 150 μL DMSO in aghaidh an tobair, croith ag 37 céim ar feadh 15 nóiméad. Léadh luach ionsúcháin ag tonnfhad 490 nm ar léitheoir micreaphláta, agus ríomhadh an ráta marthanais cille. Cinneadh raon sábháilte comhchruinnithe oibre le haghaidh tástálacha feidhmiúla leantacha.

2.7 Tomhas ROS incheallach

Ionaclúdh macrophages RAW264.7 ar phlátaí sé thobar ag dlús cealla 4 × 10⁵ in aghaidh an tobair. Tar éis cloí le cille, rinneadh cóireáil ghrúpála: grúpa rialaithe tuaslagóirí, grúpa múnla LPS, agus grúpaí cóireála eastóscáin CT (12.5, 25, 50, 100 ug/mL). Tar éis réamhchóireáil 2-h le sampla, cuireadh LPS 1 ug/mL leis seachas grúpa rialaithe tuaslagóra, gor 24 h. Braitheadh ​​leibhéal ROS incheallach trí úsáid a bhaint as modh luchtaithe fluaraiseachta-steoraithe de réir threoracha an trealaimh. Rinneadh déine fluaraiseachta a thomhas le léitheoir microplate fluaraiseachta (excitation 488 nm, astú 525 nm).

2.8 NÍL, MDA, SOD, CAT, LDH agus GSH a bhrath

Tar éis cóireáil chomhfhreagrach cille, bailíodh comhshóiteán saothraithe cille chun NÍL a thomhas ag glacadh le frithghníomhú Griess. Níodh cealla ceangailte le PBS réamh-fhuaraithe, lysed ar oighir, baineadh súiche lysate cille tar éis lártheifneoiriú (10 000 r/nim, 4 céim , 5 nóim). Chinn an trealamh BCA tiúchan iomlán próitéine i ngach sampla. Rinneadh measúnú ar a bhfuil i MDA, GSH agus táscairí gníomhaíochta einsímeacha SOD, CAT, LDH de réir lámhleabhair oibríochta an trealaimh go docht.

2.9 Cinneadh ELISA ar Chítocíní Réamh-Athlaiteacha

Fuair ​​​​cealla RAW264.7 réamhchóireáil samplach agus spreagadh LPS do 16 h iomlán. Bailíodh agus lártheifneoiríodh forshubstaintí saothraithe cille. Rinneadh tiúchain TNF- , IL- 1 , IL-6 in supernatant a chainníochtú ag feisteáin tráchtála ELISA.

2.10 Anailís ar an mBloic Thiar

Tar éis 45 nóim de LPS agus comh-gor samplach, rinneadh cealla RAW264.7 a líseáil ag baint úsáide as maolán lysis RIPA arna fhorlíonadh le cocktail coscaire protease-fosphatase. Rinneadh lysate cille a lártheifneoiriú ag 10 000 r/nóim faoi 4 chéim ar feadh 5 nóiméad. Tiúchan iomlán próitéine cainníochtaithe trealamh BCA. Dínádúraíodh próitéiní samplacha (50 ug in aghaidh an lána) ag folctha miotail 100 céim ar feadh 5 nóiméad. Scar próitéiní sprice leictreafóiréis glóthach SDS-PAGE, a aistríodh ansin go seicní PVDF. Cuireadh bac ar scannáin ar feadh 1 h le tuaslagán TBST bainne bearrtha 5 %. Goradh thar oíche ag 4 céim , antasubstaintí príomhúla ag díriú ar p38, p-p38, AKT, p-AKT, JNK, p-JNK, NF-κB p65, p-NF-κB p65 agus GAPDH . Tar éis níocháin TBST, goraíodh antasubstaintí tánaisteacha comhfhreagracha ag teocht an tseomra ar feadh 1 h. Tar éis níocháin arís agus arís eile, cuireadh imoibrí ceimiléine ultra-íogair ECL i bhfeidhm ar íomháú banna próitéine. Cuireadh anailís chainníochtúil bhanda liathscála i bhfeidhm chun leibhéal slonn choibhneasta fosfarylation-próitéin a mheas.

2.11 Anailís Staitistiúil

Baineadh úsáid as bogearraí GraphPad Prism 8.0.2 le haghaidh ríomh staitistiúil agus breacadh graf. Cuireadh torthaí turgnamhacha-sonraí cainníochtúla in iúl mar mheán ± diall caighdeánach (\\(\\bar{x} \\pm s\\)). Cuireadh ANOVA aontreo agus tástálacha iar-hoc ilchomparáide i bhfeidhm chun comparáid a dhéanamh idir grúpaí. \\(P<0.05\) represented statistically significant difference; \(P<0.01\) highly significant difference; \(P<0.001\) extremely significant difference.

3. Torthaí Turgnamhach

3.1 Torthaí Turgnaimh Aonfhachtóra

Slice thickness exerted obvious influence over the contents of acteoside and echinacoside. Slices at 0.2 cm thickness were easily over‑steamed, leading to thermal degradation of phenylethanoid‑glycoside active components. Excessively thick slices (>0.4 cm) bac ar scaoileadh substainte inmheánach, rud a laghdódh ábhar na gcomhpháirteanna inbhraite deiridh. Faoin am seasta gaile (10 nóiméad) agus an teocht a thriomú (60 céim ), bhain tiús slice 0.4 cm an scór meastóireachta cuimsitheach ab airde amach.

Torthaí ré na cóireála galúcháin: nuair a socraíodh tiús slisne go 0.4 cm agus nuair a bhí an teocht triomaithe coinnithe ag 60 céim , ní fhéadfadh dóthain ama galúcháin struchtúr cealla an phlanda a mhilleadh go leordhóthanach ionas go mbeadh sé deacair comhdhúile gníomhacha a thuaslagadh. Chomh luath agus a sháraigh an t-am gaileála 6 nóiméad, ró-ghalú fíochán luibhe damáiste agus díghrádú spreagtha ar echinacoside agus acteoside. Dá bhrí sin sainaithníodh 6 nóiméad roimh ré mar ré próiseála gaile ab fhearr.

Le haghaidh turgnaimh grádáin teochta oigheann-thriomú: socraíodh tiús slisne 0.4 cm agus am galúcháin 6 min. Tháinig ardú ar ábhar na gcomhpháirt le méadú ar theocht an triomú laistigh de raon áirithe. Nuair a chuaigh an teocht triomú thar 60 céim , ba chúis le meath suntasach ar ábhar an spriocshubstainte de bharr dianscaoileadh teirmeach ardteochta. Mar sin roghnaíodh 60 céim mar choinníoll tosaigh optamach teochta triomúcháin le haghaidh barrfheabhsú dromchla freagartha ina dhiaidh sin.

3.2 Optamú agus Fíorú Dromchla Bosca-Behnken

Críochnaíodh seacht ngrúpa déag de ritheanna turgnamhacha Box-Behnken de réir na maitrís dearaidh. Thug torthaí anailíse athraithe le fios gur bhain samhlacha aischéimniúcháin d’inneachar aicteóisíd agus éicéatóisíde araon suntas staitistiúil amach (\\(P<0.05\)). The lack‑of‑fit terms were non‑significant (\(P>0.05\)), demonstrating satisfactory model‑fitting quality. Coefficient of determination \(R^2\) values were close to 1, illustrating high consistency between predicted values and practical measured experimental data. Factor‑influence rank for acteoside yield: slice thickness > drying temperature > steaming time. Factor‑influence rank for echinacoside yield: steaming time > drying temperature >tiús slice.

Trí ríomh matamaitice múnla, ba iad na paraiméadair phróiseála teoiriciúla is fearr ná: tiús slice 0.600 cm, am cóireála gaile 5.685 min, teocht triomú 57.009 céim . Ag cur san áireamh féidearthacht oibríochta tionsclaíochta iarbhír, coigeartaíodh na paraiméadair go dtí an tiús slisnithe 0.6 cm, an t-am gaile 6 min, an teocht a thriomú 57 céim . Rinneadh trí thurgnamh bailíochtaithe comhthreomhara. Faoin gcoinníoll praiticiúil seo, b'ionann an t-ábhar acteoside tomhaiste agus 7.25 %, shroich ábhar echinacoside 31.62 %. D’fhan an diall idir luachanna tomhaiste agus réamh-mheastachán teoiriciúil faoi bhun 5 %, rud a chruthaigh go raibh an tsamhail dromchla freagartha seo iontaofa agus infheidhme chun táirgeadh de phíosaí réitigh an domhain fíor a threorú.

3.3 Scagadh Cíteatocsaineachta ar Optamaithe-PhróiseáilteCistanche tubulosaSliocht i RAW264.7 Cealla

Léirigh torthaí cíteatocsaineachta MTT nach raibh aon éifeacht thocsaineach soiléir ag tiúchan eastóscáin idir 0-100 ug/ml ar mhacrophages RAW264.7, agus léirigh sé fiú claonadh éadrom chun iomadú cille a chur chun cinn. Nuair a d’ardaigh tiúchan na cóireála go 200 ug/mL agus 400 ug/mL, tháinig laghdú suntasach ar an ráta marthanais cille i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe tuaslagóirí, rud a léirigh cíteatocsaineacht spleách ar thiúchan. Mar sin, roghnaíodh grádáin tiúchana de 12.5 ug/mL, 25 ug/mL, 50 ug/mL, 100 ug/mL mar thiúchan oibre sábháilte le haghaidh measúnachtaí ceallacha a bhaineann le strus ocsaídiúcháin agus athlasadh ina dhiaidh sin.

3.4 Cistanche tubulosaSliocht Leibhéal ROS Incheallach Laghdaithe i Macrophages Spreagtha LPS

I gcomparáid le grúpa rialaithe tuaslagóirí, tháinig méadú thar a bheith suntasach ar dhéine fluaraiseacha intracellular ROS de ghrúpa samhail-LPS (\\(P<0.001\)), confirming successful construction of cellular oxidative‑damage model. After intervention with gradient‑concentration Cistanche tubulosaeastóscadh, laghdaigh carnadh ROS incheallach ar bhealach dáileog-spleách. Léirigh gach grúpa cóireála drugaí laghdú a bhí suntasach go staitistiúil ar ROS i gcomparáid le grúpa múnla LPS (\\(P<0.001\)). This finding demonstrated that processed‑herb extract could effectively restrain excess ROS generation under inflammatory stimulation.

3.5 Éifeachtaí ar Ábhar NÍL agus MDA

Feidhmíonn NÍL mar idirghabhálaí athlastach clasaiceach arna scaoileadh ag macrophages gníomhachtaithe. Is bithmharcóir de chaighdeán óir é MDA a léiríonn gortú ocsaídiúcháin sárocsaídiúcháin lipid. I gcomparáid le grúpa rialaithe tuaslagóirí, d'ardaigh spreagadh LPS go mór ábhar NÍL agus MDA i gcealla RAW264.7 (\\(P<0.001\)). Different dosages of Cistanche tubulosad'fhéadfadh cóireáil sliocht NÍL tiúchan a ísliú go suntasach. Maidir le táscaire MDA: níor tháirg an grúpa 12.5 ug/mL feabhsú suntasach ó thaobh staidrimh de; Tháinig laghdú infheicthe ar thiúchanghrúpaí 25-100 ug/mL ar an leibhéal MDA (\\(P<0.001\)). The results illustrated that extracts alleviated LPS‑triggered lipid‑peroxidation injury and inflammatory‑mediator over‑production.

3.6 Tionchar ar Tháscairí Bithcheimiceacha a Bhaineann le Frithocsaídeoirí SOD, CAT, LDH, GSH

Tar éis dúshlán LPS, thit gníomhaíocht einsímeach SOD, CAT, LDH chomh maith le hábhar GSH go géar i gcoibhneas le grúpa rialaithe tuaslagóra (\\(P<0.001\)). Low‑dose (12.5 μg/mL) extract treatment could significantly raise SOD activity, but failed to generate prominent changes for CAT and LDH activity. Medium‑and‑high concentration groups (25 μg/mL, 50 μg/mL, 100 μg/mL) concentration‑dependently enhanced SOD, CAT, LDH enzyme activities and intracellular GSH content (\(P<0.001\)). It indicated that optimally‑processed Cistanche tubulosaD’fhéadfadh eastóscáin decoction-píosa cumas cosanta ingenous frith-oxidant cheallacha a athbhunú i gcoinne maslaí ocsaídiúcháin a tharlódh ag LPS.

3.7 Tionchar Coisctheach ar Eisiúint Pro-Alasta Cytokine TNF- , IL-1 , IL-6

Léirigh torthaí braite ELISA gur chuir spreagadh LPS go láidir chun cinn an secretion TNF- , IL-1 , IL-6 ó RAW264.7 macrophages (\\(P<0.001\)). With the increase of Cistanche tubulosatiúchan cóireála eastósctha, cuireadh cainníocht scaoileadh na dtrí chitocínín pro-athlastacha tábhachtacha seo faoi chois de réir a chéile, rud a léirigh comhghaol soiléir idir dháileog-fhreagairt. Dheimhnigh sé gur fheidhmigh sliocht luibhe feidhm fhrith-athlastach láidir trí secretion pro-inflammatory-cytokine a shrianadh ó mhacrophages gníomhachtaithe.

3.8 Rialachán maidir le p38/AKT/JNK/NF‑κB Fosfarailiú Conair Chomharthaíochta

Thaispeáin sonraí turgnamhacha an Iarthair-blot go raibh na cóimheasa de p-p38/p38, p-AKT/AKT, p-JNK/JNK agus p-NF-κB/NF-κB ardaithe go suntasach i múnla-ghrúpa LPS in aghaidh grúpa rialaithe tuaslagóirí (\\(P<0.001\)). Medium‑and‑high‑dosage Cistanche tubulosatháinig laghdú suntasach ar idirghabháil eastósctha p-p38/p38 agus cóimheas p-JNK/JNK (\\(P<0.001\)). All concentration‑treatment groups obviously down‑regulated p‑AKT/AKT and p‑NF‑κB/NF‑κB phosphorylation level (\(P<0.05\) or \(P<0.001\)). These observations proved that Cistanche tubulosaRinne sliocht decoction-píosa gortú ocsaídiúcháin-athlastach a mhaolú trí ghníomhachtú hipearfosfarylation de líonra comharthaíochta p38/AKT/JNK/NF-κB a shochtadh.

4. Plé

Riachtanais phróiseála traidisiúnta taifeadta i Pharmacopoeia na Síne le haghaidhCistanche tubulosaáirítear go príomha baint neamhíonachta, níocháin, tais, slicing agus triomú, gan paraiméadair uimhriúla beachta a shonrú maidir le tiús slice, fad gaile agus teocht a thriomú. Cruthaíonn próiseáil láimhe neamhchaighdeánach luaineacht mhór cáilíochta i dtáirgí decoction-píosa tráchtála. Is comhdhúile bithghníomhacha atá lipéadaithe go teirmeach iad gliocóisídí feinileatánóideach (eicseacóisíd agus aicteóisíd). Cuirfidh am nó teocht teasa míchuí tús le dianscaoileadh ceimiceach agus laghdóidh sé luach míochaine. Léirigh ár dturgnaimh aonfhachtóire go gcaillfí sprioc-chomhpháirteanna glycosíde dá ndéanfaí galúchán neamhleor agus ró-ard chomh maith le teocht ró-ard triomúcháin. Tuilleadh leas iomlán a bhaint ilfhachtóir Bosca-Behnken a fhaightear paraiméadair déantúsaíochta praiticiúla: slice tiús 0.6 cm, steaming 6 min, a thriomú 57 céim . Faoin gcoinníoll seo, shroich an t-ábhar aicteóisíde agus éiceachóisídí 7.25 % agus 31.62 %, rud a sháraigh tairseach íosta cáilíochta Pharmacopoeia. Soláthraíonn an prótacal optamaithe seo tagairtí teicniúla cainníochtúla indéanta do phróiseáil chaighdeánaithe thionsclaíoch de thionscnamh XinjiangCistanche tubulosa.

Is próisis paiteolaíocha idirnasctha go docht iad strus ocsaídiúcháin agus athlasadh. Cothaíonn barraíocht ROS sárocsaídiú lipid agus gineann sé MDA, a ghníomhaíonn tuilleadh macrophages imdhíonachta dúchasacha. Is éard atá i macrófaigí gníomhachtaithe secrete cítocíní flúirseach NÍL agus iolracha pro-athlastacha, a mhéadaíonn go contrártha táirgeadh ROS incheallach, ag foirmiú timthriall fí ocsaídiúcháin-athlastach féin-aimplitheach. Is féidir le substaintí nádúrtha frith-ocsaídeacha a dhíorthaítear ó phlandaí an lúb phaiteolaíoch seo a bhriseadh trí chóras einsímí frith-ocsaídiúcháin ingenous a ardú agus srian a chur ar thrasuíomh comhartha athlastach. Sa staidéar in vitro seo, próiseáilte go barrmhaithCistanche tubulosalaghdaíodh leibhéil ROS, NO agus MDA le eastóscáin decoction-píosa, agus feabhsaíodh gníomhaíochtaí SOD, CAT, LDH agus ábhar GSH i macrophages RAW264.7 spreagtha ag LPS. Ag an am céanna, chuir sé bac ar secretion pro-inflammatory-cytokine TNF- , IL-1 , IL-6, rud a léirigh strus frith-ocsaídiúcháin chomhtháite agus cumas frith-athlastach.

Comhdhéanann móilíní teaghlaigh próitéine-kinase mitogen-gníomhachtaithe p38, JNK mar aon le AKT agus NF-κB mol trasduchtúcháin comhartha lárnach a dhéanann idirghabháil ar fhreagraí athlastacha-ocsaídiúcháin macrophage. Ar spreagadh LPS, spreagann comhartha in aghaidh an tsrutha gníomhachtú fosfarylation de p38, JNK agus AKT, a chuireann chun cinn go seicheamhach fosfarú fo-aonad NF-κB p65 agus traslonnú núicléach. Feidhmíonn NF-κB gníomhachtaithe mar fhachtóir trascríobh agus cuireann sé tús le trascríobh baisceanna móra de ghéinte pro-inflammatory-cytokine agus ocsaídiúcháin a bhaineann le strus. Léirigh ár dtorthaí blota Thiar é sinCistanche tubulosad'fhéadfadh sliocht fosfarylation de p38, JNK, AKT agus NF-κB p65 a shochtadh. Dá bhrí sin, tátal againn go mbaintear amach a bhithghníomhaíocht frith-ocsaídiúcháin-strus agus frith-athlastach, go páirteach ar a laghad, trí róghníomhaíocht a bhlocáil ar ais comharthaíochta p38/AKT/JNK/NF-κB.

Tá roinnt teorainneacha laistigh den taighde reatha. Tá gach fíorú feidhmiúcháin teoranta do leibhéal chultúr na gceall in vitro. Tá gá le tuilleadh turgnaimh in vivo ar mhúnla ainmhithe chun feidhmíocht chógasdhinimiciúla in vivo na bpíosaí maisithe optamaithe a fhíorú. Ina theannta sin, ghlac an staidéar seo sliocht iomlán measctha as píosaí decoction, mar sin ní féidir linn idirdhealú a dhéanamh idir ranníocaíocht aonair echinacoside, acteoside agus meitibilítí tánaisteacha beaga eile. Is féidir le taighde leantach comhdhúile monaiméir a aonrú chun acmhainneacht frith-ocsaídiúcháin-strus faoi seach a chur i gcomparáid, agus imscrúdú ar éifeacht comhoiriúnachta a dhéanamh. Mar sin féin, seachadann ár gcuid oibre faoi láthair paraiméadair phraiticiúla próiseála-teicneolaíochta agus réamhfhianaise mheicníochta lena fhorbairtCistanche tubulosatáirgí cúraim sláinte a bhaineann leo.

5. Conclúid

Mar fhocal scoir, is féidir leis an sreabhadh oibre próiseála nuachóirithe atá optamaithe le modheolaíocht dromchla freagartha Box-Behnken (tiús slisne 0.6 cm, steaming 6 min, teocht a thriomú 57 céim) méadú suntasach a dhéanamh ar ábhar acteoside agus echinacoside de.Cistanche tubulosapíosaí decoction. Bíonn éifeachtaí suntasacha frith-ocsaídiúcháin agus frith-athlastacha i gcoinne damáiste macraphage RAW264.7 de bharr LPS-spreagtha ag sleachta a ullmhaítear ó na slisní luibhe seo a phróiseáiltear go barrmhaith. Tá comhghaol idir an mheicníocht bhunúsach agus athchóiriú an chórais chosanta frithocsaídeach intracellular agus cosc ​​ar ghníomhachtú iomarcach ar chonair chomharthaíochta athlastach p38/AKT/JNK/NF-κB. Soláthraíonn an staidéar seo bonn turgnamhach soladach do tháirgeadh tionsclaíoch caighdeánaithe agus do shaothrú bia feidhmiúilCistanche tubulosaacmhainní.

Tagairtí

Lín J, Yu H, Zhao Y, et al. Eastóscadh echinacoside óCistanche tubulosa(Schenk) R. Wight agus imscrúdú ar a éifeacht chosanta ar ghortú ae i bhfrancaigh sepsis. Teicneolaíocht an Bhia, 2023, 43:e010523.

Guo J, Tang S, Miao Y, et al. Éifeachtaí frith-athlastacha gliocóisídí lignan óCistanche tubulosaEascraíonn ar chealla macraphage RAW264.7 spreagtha LPS/IFN trí chonair PI3K/AKT. Biteicneolaíocht Chógaisíochta Reatha, 2021, 22(10):1380-1391.

Rani V, Deep G, Singh RK, et al. Strus ocsaídiúcháin agus neamhoird meitibileach: Pathogenesis agus straitéisí teiripeacha. Eolaíochtaí Beatha, 2016, 148: 183-193.

Páirc JH, Kim JH, Jang S I. Frith-athlastach de dise-necionyl cis-khellactone i gcealla RAW264.7 spreagtha LPS agus a ghníomhaíocht coisctheach ar hidrealas eapocsaíd intuaslagtha. Héilin, 2023, 9(10):e21032.

Maolaíonn Chung YC, Song S J. Isobavachin freagairtí athlastacha spreagtha lipopolysaccharide i macraphages trí chonairí comharthaíochta MAPK agus NF-κB a shochtadh. Journal of Ethnopharmacology, 2024, 321: 117501.

He X, Li Y, Deng B. An cosán comharthaíochta PI3K/AKT in athlasadh, bás cille agus foirmiú scar glial tar éis gortú trámach do chorda an dromlaigh. Iomadú Cille, 2022,55(9):e13275.