1. Réamhrá

Le blianta beaga anuas tá méadú tagtha ar spéis na comhábhair bia a bhfuil airíonna imdhíon-mhodúlach acu a shainaithint mar aon lena spriocanna móilíneacha faoi seach. Mar gheall ar a n-éagsúlacht ard ligand, léiríonn an superteaghlach poitéinseal gabhdóra neamhbhuan de chainéil ian (cainéil TRP) aicme an-suimiúil spriocstruchtúir féideartha.

Áirítear le supertheaghlach an chainéil TRP mamaigh sé theaghlach próitéine a bhaineann leo, is iad sin an ankyrin (TRPA), an canónach (TRPC), an melastatin (TRPM), an mucolipin (TRPML), an polycystin (TRPP), agus an teaghlach vanilloid (TRPV), agus is gnách go roinneann siad go léir sé mhír trasmembrane a chomhcheanglaíonn mar tetramers chun poration-1 a fhoirmiú a athrú. D’fhéadfadh gurb é an cainéal TRPV1, le fada an lá, an ball den supertheaghlach TRP is déine a ndearnadh imscrúdú air. Aithníodh TRPV1 ar dtús mar an gabhdóir le haghaidh capsaicin, an comhábhar géar de phiobair chili.[2] Níos déanaí, taispeánadh freisin na comhábhair pungent ó ginger, na gingerols, a ghníomhachtú TRPV1.[3]

Tá ról bitheolaíoch TRPV1 i gcineálacha cealla neamhnéarónacha fós faoi imscrúdú fairsing, ach tugann na torthaí atá ar fáil le tuiscint go bhfuil feidhmeanna i bhfad níos faide ná dearcadh céadfach agus teirmeach. Mar shampla, chuir idirghabháil 12 seachtaine le dáileog laethúil de 0.15 mg den nonivamide agonist TRPV1, analóg struchtúrach capsaicin, cosc ​​ar ghnóthachan cothaithe-spreagtha i mais saille coirp, agus mhéadaigh leibhéil serotonin plasma in ábhair shláintiúla róthrom.[4]

I 3T3-L1 laghdaigh gníomhachtú adipocytes TRPV1 ag nonivamide carnadh lipid le linn difreála agus aibithe trí léiriú PPAR𝛾 a shochtadh.[5] I macraphages, mhaolaigh capsaicin agus nonivamide scaoileadh cítocíní pro-athlastacha mar IL6, CXCL8, agus TNF-alpha, de réir TRPV1-spleách.[6] Mar sin féin, tá feidhmeanna áirithe TRPV1 i leukocytes fola daonna doiléir fós. I gcealla NK daonna, spreag capsaicin 10 agus 50 μM ardú i dtiúchan Ca2+ intracellular, rud a léiríonn cainéal feidhmiúil TRPV1.[7]

Mar sin féin, bhí feidhmeanna éifeachtóra cille NK maolaithe cosúil le dígranulation cíteatocsaineach agus secretion cítocine, a tharlódh de bharr réamhchóireáil na gcealla le capsaicin ar feadh 1 h i raon tiúchana 10-100 μM, neamhspleách den chuid is mó ar TRPV1.[7] I gcealla T, doiciméadaíodh go raibh baint ag TRPV1 le próisis chomharthaíochta gabhdóirí cille T, iomadú agus difreáil cille T, chomh maith le táirgeadh cítocín.[8] Léirigh obair roimhe seo ónár ngrúpa freisin léiriú feidhmiúil TRPV1 i gcealla T bunscoile daonna.[9] Ina theannta sin, léirigh anailísí ar fhreagairt dáileoga i dtiúchan idir 0.03 go 300 μmol L -1 go gcuireann [6]-gingerol cosc ​​ar secretion cytokine ag leukocytes daonna bunscoile le luach IC50 de 82.2 μmol L−1.

Mar sin féin, léirigh cainníochtú [6]-gingerol i samplaí plasma d'ábhair shláintiúla meántiúchan plasma uasta de 42.0 ± 16.3 nmol L−1 tar éis ionghabháil 1 L de thae ginger. Ós rud é nach raibh aon tionchar suntasach ag na [6]-tiúchain sinséir ar an secretion cítocine i staidéir roimhe seo,[9] níl sé soiléir, an bhfuil tiúchan ábhartha chothaithe de 50 nmol L−1, á bhaint amach i bplasma fola tar éis 1 L de thae ginger a ithe, leordhóthanach chun freagairtí imdhíonachta ceallacha i leukocytes bunscoile daonna eile a mhodhnú.

I gcás neodrófail dhaonna, tá teorainn leis an eolas faoi ról feidhme TRPV1. Cé gur léirigh Köse agus Nazıroglu˘ [10] go raibh sreabháin Ca2+- i neodrófail mar fhreagra ar 10 μM capsaicin le laghdú ag capsazepine antagonist TRPV1, níor léirigh torthaí eile capsaicin chun sní Ca2+ a aslú nuair a tástáladh é i raon tiúchana de RNA-1,01 μM inbhraite. slonn.[11]

Is iad neutrophils na leoicicítí is flúirseach san fhuil dhaonna, arb ionann iad agus 60-70 % de na cealla fola bána go léir a scaiptear. Is iad na chéad chealla imdhíonachta a earcaítear chuig suíomhanna an ionfhabhtaithe; dá bhrí sin is minic a thagraítear dóibh mar an chéad líne chosanta.[12] Spreagtar earcú neodrófilí, i measc nithe eile, an peiptíd baictéarach nó miteacoindrí-díorthaithe N-Formylmethionine-leucyl-feinalalainín (fMLF) nó ceimicíní amhail CXCL8 (IL-8).[13]

Áirítear ar mheicníochtaí cosanta neodrófilí fagaicíotóis,[14] scaoileadh einsímí frithmhiocróbacha trí dhíghrádú, [15] giniúint speiceas ocsaigine imoibríoch (ROS),[16] agus foirmiú gaistí eischeallach neodrófail.[17] Chomh maith leis na meicníochtaí cosanta díreacha seo, cuireann neodróifilí le freagairtí imdhíonacha ina dhiaidh sin trí cítocíní agus ceimicíní éagsúla a scaoileadh.[18] Chomh maith leis sin, féadann neutrophils dul faoi phróiseas primeála a chuireann ar a gcumas freagairt níos láidre a thabhairt do ghníomhachtú iomlán ina dhiaidh sin.[16b]

Le blianta beaga anuas, tá fás tagtha ar an bhfianaise gur féidir le comhábhair ó bhia agus/nó ó phlandaí íocshláinte ceann amháin nó níos mó de na freagraí cosanta a luaitear ar neodrófail dhaonna a mhodhnú. Áirítear ar na modhnuithe seo gníomhaíocht fagaicíotóis mhéadaithe[19] agus giniúint ROS,[20] cemotaxis méadaithe i dtreo fMLF,[21] agus foirmiú gaistí eischeallach neodrófail.[20] Níor aithníodh an comhdhúil/na comhdhúile gníomhacha, áfach. Rinne comhábhair ó Ferula akitschkensis (𝛽-pinene, sabinene, 𝛾-terpinene, geranylacetone, agus isobornylacetate) neodrófilí a dhí-íogrú chuig sní isteach Ca2+ fMLF- agus CXCL8-spreagtha agus coiscthe fMLF spreagtha cemotanaxisy, nuair a rinneadh na héifeachtaí chemotanaxis spreagtha trí mheán na meáin. TRPV1.[22]

Bunaithe ar na sonraí atá ar fáil, rinneamar hipitéisiú go bhféadfadh tionchar a bheith ag gníomhachtú TRPV1 de bharr ligand trí [6]-gingerol ar fheidhmeanna ginearálta neodrófail, go díreach nó trí fheabhas a chur ar a gcuid freagraí ar spreagthaigh a ghníomhachtú. Laistigh de raon feidhme na hipitéise seo, dhíríomar go háirithe ar a shoiléiriú, an bhfuil tiúchan fíoraithe a bhaineann le hábhar cothaitheach leordhóthanach chun freagairtí imdhíonachta ceallacha i neutrophils bunscoile daonna a mhodhnú mar chuid den daonra leukocyte. '

Ina theannta sin, rinneamar iarracht comparáid a dhéanamh idir leibhéil slonn RNA gach ball den supertheaghlach TRP mamaigh i gcúig cinn de na cineálacha cille is suntasaí san fhuil dhaonna chun forbhreathnú cuimsitheach cáilíochtúil agus cainníochtúil a fháil ar léiriú cainéal TRP i leukocytes daonna.

2. Torthaí

2.1. Líon agus Leibhéil Athscríbhinne Coibhneasta Cainéil TRP i Leukocytes Daonna

Chun léiriú RNA cainéal TRP i leukocytes fola a mheas, rinneadh cúig cinn de na cineálacha cille leukocyte is suntasaí a leithlisiú ó fhuil deontóirí sláintiúla agus rinneadh anailís ar léiriú RNA de chainéil TRP trí RT-PCR cainníochtúil (Fíor 1).

Braitheadh ​​tras-scríbhinní sonracha den TRPV chomh maith leis an teaghlach TRPM le minicíochtaí arda de 75–100% i ngach cineál cille a ndearnadh anailís orthu. Ba é an meánmhinicíocht fhoriomlán ag breithniú gach cineál cille ná 96% don teaghlach TRPV agus 98% don teaghlach TRPM. Bhí tras-scríbhinní TRPC-shonracha i bhfad níos lú flúirseach, ag réimsiú ó 0% i monocytes, cealla NK, cealla T, agus cealla B go 100% i gcealla NK, agus cealla T le meánmhinicíocht iomlán de 53% (Fíor 1A). Níor aimsíodh an tras-scríbhinn TRPC5-shonrach ach amháin i neutrophils, le minicíocht 70%.

Chomh maith leis sin, léirigh an athscríbhinn TRPA1-shonrach go ginearálta raidhse sách íseal sna cineálacha cille a ndearnadh anailís orthu le minicíocht 100% i neutrophils, 25% i monocytes, 80% i gcealla NK, 100% i gcealla T, agus 60% i gcealla B. Ar an gcaoi chéanna, léirigh an tras-scríbhinn TRPML3-shonrach minicíocht íseal i neutrophils (50%), monocytes (25%), cealla NK (40%), agus cealla B (20%), ach minicíocht 100% i gcealla T. Braitheadh ​​an tras-scríbhinn sonrach TRPV1 i ngach cineál cille, ag taispeáint minicíocht 100% i monocytes, cealla NK, agus cealla T, agus minicíocht 90% i neodrófail agus 80% i gcealla B.

Maidir le slonn coibhneasta RNA, i gcomparáid leis na minicíochtaí faoi seach, léirigh na bealaí TRP patrún slonn níos sainiúla cille, mar is léir trí chomparáid a dhéanamh idir na luachanna Δct faoi seach sna cineálacha cealla éagsúla a ndearnadh anailís orthu (Fíor 1B). Mar shampla, braitheadh ​​​​TRPP3 le minicíocht 100% i ngach cineál cille, ach léirigh sé go soiléir an leibhéal léirithe is airde i monocytes.

I gcodarsnacht leis sin, aimsíodh an cainéal TRPV2 i ngach ceann de na cineálacha cille a ndearnadh imscrúdú orthu, le leibhéal ard inchomparáide RNA-léiriú chomh maith le minicíocht ard. Ar an gcaoi chéanna, bhí leibhéil tras-scríbhinní TRPV1 comhchosúil i ngach cineál cille a scrúdaíodh (Fíor 1B).

2.2. Slonn Dromchla TRPV1 ar Neutrophils

Níl an t-eolas reatha faoi fheidhm TRPV1 i neodrófail dhaonna soiléir fós. Chun ról TRPV1 i neodrófail dhaonna a fhiosrú tuilleadh, rinneamar imscrúdú ar an gcéad dul síos an bhfuil an cainéal TRPV1 curtha in iúl ar dhromchla na neodrófilí daonna príomhúla ag baint úsáide as cíteiméadracht sreabhadh cille beo (Fíor 2).

Rinneadh na neodrófail scoite a dhaite le haghaidh CD15 mar mharcóir dromchla do neodrófail (Fíor 2A, B) agus ag an am céanna dhaite iad le hantasubstaint a ardaíodh i gcoinne eiteabó sa chéad lúb eischeallach den phróitéin TRPV1 (Fíor 2B) nó sa rialú isitíopa faoi seach, agus feidhmíonn an dara ceann mar ionadaí chun ceangal neamhshonrach a thomhas (Fíor 2A). Laistigh den daonra CD15+, rinneadh anailís ar dhéine an fhluaraiseachta do FITC. Mar thoradh ar dhathú na neodrófilí leis an antashubstaint TRPV1 tháinig comhartha fluaraiseachta soiléir i gcomparáid leis an rialú isitíopa, rud a dhearbhaigh léiriú dromchla TRPV1 i neodrófail dhaonna bunscoile (Fíor 2C). Le hanailís a dhéanamh ar neodrófail ó cheathrar deontóirí aonair, léiríodh slonn dromchla inchomparáide de TRPV1 (Fíor 2D).

2.3. [6]-Méadú de bharr Gingerol ar Ca Intracellular2+

Ós rud é go mbeidh sní isteach Ca2+ mar thoradh ar ghníomhachtú TRPV1 arna spreagadh ag ligand, [23] cinneadh intracellular Ca2+ tiúchain neodrófilí tríd an dath íogair Ca2+- Fura-2. Bunaithe ar ár dtorthaí roimhe seo,[9] roghnaíodh tiúchan 50 nM den ligand TRPV1 [6]-gingerol aitheanta agus am goir de 2 h. Léirigh na hanailísí gur tháinig méadú ar thiúchan Ca2+ intracellular de bharr gor na neodrófilí le 50 nM [6]-gingerol, a bhí ar an meán 18.4% ± 1.0% den luach uasta, mar a chinntear trí 1 μM den ionomycin ionophore a chur i bhfeidhm. Ba é an méadú a tharlódh de bharr DMSO ná 4.7% ± 1.2% (Fíor 3).

2.4. Tionchar [6]-Gingerol ar Slonn TRPV1

Ansin, bhí sé mar aidhm againn anailís a dhéanamh ar thionchar spreagadh TRPV1 ag [6] -gingerol ar abairt TRPV1 ag an leibhéal tras-scríbhinn trí q-RTPCR chomh maith le leibhéal próitéin dromchla trí staining cille beo. Chun na críche sin, goraíodh neodrófail dhaonna le 50 nM [6] - sinséir ar feadh 2 h agus rinneadh na leibhéil slonn faoi seach a chainníochtú.

Ní raibh tionchar ag an gor 2 h seo ar athscríbhinn TRPV1 ná ar leibhéil próitéine (Fíor 4), agus níor athraigh sé freisin, ach amháin i gcás IL6, IL17A, IL24, C5, agus GDF5, an abairt RNA de ghéinte coitianta cytokine agus chemokine a imscrúdaíodh (Fíor S1, Tábla S2, Faisnéis Tacaíochta).

2.5. Tionchar [6]-Gingerol ar Léiriú Marcóirí Dromchla Neutrophil

1. Réamhrá

Le blianta beaga anuas tá méadú tagtha ar spéis na comhábhair bia a bhfuil airíonna imdhíon-mhodúlach acu a shainaithint mar aon lena spriocanna móilíneacha faoi seach. Mar gheall ar a n-éagsúlacht ard ligand, léiríonn an superteaghlach poitéinseal gabhdóra neamhbhuan de chainéil ian (cainéil TRP) aicme an-suimiúil spriocstruchtúir féideartha.

Áirítear le supertheaghlach an chainéil TRP mamaigh sé theaghlach próitéine a bhaineann leo, is iad sin an ankyrin (TRPA), an canónach (TRPC), an melastatin (TRPM), an mucolipin (TRPML), an polycystin (TRPP), agus an teaghlach vanilloid (TRPV), agus is gnách go roinneann siad go léir sé mhír trasmembrane a chomhcheanglaíonn mar tetramers chun poration-1 a fhoirmiú a athrú. D’fhéadfadh gurb é an cainéal TRPV1, le fada an lá, an ball den supertheaghlach TRP is déine a ndearnadh imscrúdú air. Aithníodh TRPV1 ar dtús mar an gabhdóir le haghaidh capsaicin, an comhábhar géar de phiobair chili.[2] Níos déanaí, taispeánadh freisin na comhábhair pungent ó ginger, na gingerols, a ghníomhachtú TRPV1.[3]

Tá ról bitheolaíoch TRPV1 i gcineálacha cealla neamhnéarónacha fós faoi imscrúdú fairsing, ach tugann na torthaí atá ar fáil le tuiscint go bhfuil feidhmeanna i bhfad níos faide ná dearcadh céadfach agus teirmeach. Mar shampla, chuir idirghabháil 12 seachtaine le dáileog laethúil de 0.15 mg den nonivamide agonist TRPV1, analóg struchtúrach capsaicin, cosc ​​ar ghnóthachan cothaithe-spreagtha i mais saille coirp, agus mhéadaigh leibhéil serotonin plasma in ábhair shláintiúla róthrom.[4]

I 3T3-L1 laghdaigh gníomhachtú adipocytes TRPV1 ag nonivamide carnadh lipid le linn difreála agus aibithe trí léiriú PPAR𝛾 a shochtadh.[5] I macraphages, mhaolaigh capsaicin agus nonivamide scaoileadh cítocíní pro-athlastacha mar IL6, CXCL8, agus TNF-alpha, de réir TRPV1-spleách.[6] Mar sin féin, tá feidhmeanna áirithe TRPV1 i leukocytes fola daonna doiléir fós. I gcealla NK daonna, spreag capsaicin 10 agus 50 μM ardú i dtiúchan Ca2+ intracellular, rud a léiríonn cainéal feidhmiúil TRPV1.[7]

Mar sin féin, bhí feidhmeanna éifeachtóra cille NK maolaithe cosúil le dígranulation cíteatocsaineach agus secretion cítocine, a tharlódh de bharr réamhchóireáil na gcealla le capsaicin ar feadh 1 h i raon tiúchana 10-100 μM, neamhspleách den chuid is mó ar TRPV1.[7] I gcealla T, doiciméadaíodh go raibh baint ag TRPV1 le próisis chomharthaíochta gabhdóirí cille T, iomadú agus difreáil cille T, chomh maith le táirgeadh cítocín.[8] Léirigh obair roimhe seo ónár ngrúpa freisin léiriú feidhmiúil TRPV1 i gcealla T bunscoile daonna.[9] Ina theannta sin, léirigh anailísí ar fhreagairt dáileoga i dtiúchan idir 0.03 go 300 μmol L -1 go gcuireann [6]-gingerol cosc ​​ar secretion cytokine ag leukocytes daonna bunscoile le luach IC50 de 82.2 μmol L−1.

Mar sin féin, léirigh cainníochtú [6]-gingerol i samplaí plasma d'ábhair shláintiúla meántiúchan plasma uasta de 42.0 ± 16.3 nmol L−1 tar éis ionghabháil 1 L de thae ginger. Ós rud é nach raibh aon tionchar suntasach ag na [6]-tiúchain sinséir ar an secretion cítocine i staidéir roimhe seo,[9] níl sé soiléir, an bhfuil tiúchan ábhartha chothaithe de 50 nmol L−1, á bhaint amach i bplasma fola tar éis 1 L de thae ginger a ithe, leordhóthanach chun freagairtí imdhíonachta ceallacha i leukocytes bunscoile daonna eile a mhodhnú.

I gcás neodrófail dhaonna, tá teorainn leis an eolas faoi ról feidhme TRPV1. Cé gur léirigh Köse agus Nazıroglu˘ [10] go raibh sreabháin Ca2+- i neodrófail mar fhreagra ar 10 μM capsaicin le laghdú ag capsazepine antagonist TRPV1, níor léirigh torthaí eile capsaicin chun sní Ca2+ a aslú nuair a tástáladh é i raon tiúchana de RNA-1,01 μM inbhraite. slonn.[11]

Is iad neutrophils na leoicicítí is flúirseach san fhuil dhaonna, arb ionann iad agus 60-70 % de na cealla fola bána go léir a scaiptear. Is iad na chéad chealla imdhíonachta a earcaítear chuig suíomhanna an ionfhabhtaithe; dá bhrí sin is minic a thagraítear dóibh mar an chéad líne chosanta.[12] Spreagtar earcú neodrófilí, i measc nithe eile, an peiptíd baictéarach nó miteacoindrí-díorthaithe N-Formylmethionine-leucyl-feinalalainín (fMLF) nó ceimicíní amhail CXCL8 (IL-8).[13]

Áirítear ar mheicníochtaí cosanta neodrófilí fagaicíotóis,[14] scaoileadh einsímí frithmhiocróbacha trí dhíghrádú, [15] giniúint speiceas ocsaigine imoibríoch (ROS),[16] agus foirmiú gaistí eischeallach neodrófail.[17] Chomh maith leis na meicníochtaí cosanta díreacha seo, cuireann neodróifilí le freagairtí imdhíonacha ina dhiaidh sin trí cítocíní agus ceimicíní éagsúla a scaoileadh.[18] Chomh maith leis sin, féadann neutrophils dul faoi phróiseas primeála a chuireann ar a gcumas freagairt níos láidre a thabhairt do ghníomhachtú iomlán ina dhiaidh sin.[16b]

Le blianta beaga anuas, tá fás tagtha ar an bhfianaise gur féidir le comhábhair ó bhia agus/nó ó phlandaí íocshláinte ceann amháin nó níos mó de na freagraí cosanta a luaitear ar neodrófail dhaonna a mhodhnú. Áirítear ar na modhnuithe seo gníomhaíocht fagaicíotóis mhéadaithe[19] agus giniúint ROS,[20] cemotaxis méadaithe i dtreo fMLF,[21] agus foirmiú gaistí eischeallach neodrófail.[20] Níor aithníodh an comhdhúil/na comhdhúile gníomhacha, áfach. Rinne comhábhair ó Ferula akitschkensis (𝛽-pinene, sabinene, 𝛾-terpinene, geranylacetone, agus isobornylacetate) neodrófilí a dhí-íogrú chuig sní isteach Ca2+ fMLF- agus CXCL8-spreagtha agus coiscthe fMLF spreagtha cemotanaxisy, nuair a rinneadh na héifeachtaí chemotanaxis spreagtha trí mheán na meáin. TRPV1.[22]

Bunaithe ar na sonraí atá ar fáil, rinneamar hipitéisiú go bhféadfadh tionchar a bheith ag gníomhachtú TRPV1 de bharr ligand trí [6]-gingerol ar fheidhmeanna ginearálta neodrófail, go díreach nó trí fheabhas a chur ar a gcuid freagraí ar spreagthaigh a ghníomhachtú. Laistigh de raon feidhme na hipitéise seo, dhíríomar go háirithe ar a shoiléiriú, an bhfuil tiúchan fíoraithe a bhaineann le hábhar cothaitheach leordhóthanach chun freagairtí imdhíonachta ceallacha i neutrophils bunscoile daonna a mhodhnú mar chuid den daonra leukocyte. '

Ina theannta sin, rinneamar iarracht comparáid a dhéanamh idir leibhéil slonn RNA gach ball den supertheaghlach TRP mamaigh i gcúig cinn de na cineálacha cille is suntasaí san fhuil dhaonna chun forbhreathnú cuimsitheach cáilíochtúil agus cainníochtúil a fháil ar léiriú cainéal TRP i leukocytes daonna.

2. Torthaí

2.1. Líon agus Leibhéil Athscríbhinne Coibhneasta Cainéil TRP i Leukocytes Daonna

Chun léiriú RNA cainéal TRP i leukocytes fola a mheas, rinneadh cúig cinn de na cineálacha cille leukocyte is suntasaí a leithlisiú ó fhuil deontóirí sláintiúla agus rinneadh anailís ar léiriú RNA de chainéil TRP trí RT-PCR cainníochtúil (Fíor 1).

Braitheadh ​​tras-scríbhinní sonracha den TRPV chomh maith leis an teaghlach TRPM le minicíochtaí arda de 75–100% i ngach cineál cille a ndearnadh anailís orthu. Ba é an meánmhinicíocht fhoriomlán ag breithniú gach cineál cille ná 96% don teaghlach TRPV agus 98% don teaghlach TRPM. Bhí tras-scríbhinní TRPC-shonracha i bhfad níos lú flúirseach, ag réimsiú ó 0% i monocytes, cealla NK, cealla T, agus cealla B go 100% i gcealla NK, agus cealla T le meánmhinicíocht iomlán de 53% (Fíor 1A). Níor aimsíodh an tras-scríbhinn TRPC5-shonrach ach amháin i neutrophils, le minicíocht 70%.

Chomh maith leis sin, léirigh an athscríbhinn TRPA1-shonrach go ginearálta raidhse sách íseal sna cineálacha cille a ndearnadh anailís orthu le minicíocht 100% i neutrophils, 25% i monocytes, 80% i gcealla NK, 100% i gcealla T, agus 60% i gcealla B. Ar an gcaoi chéanna, léirigh an tras-scríbhinn TRPML3-shonrach minicíocht íseal i neutrophils (50%), monocytes (25%), cealla NK (40%), agus cealla B (20%), ach minicíocht 100% i gcealla T. Braitheadh ​​an tras-scríbhinn sonrach TRPV1 i ngach cineál cille, ag taispeáint minicíocht 100% i monocytes, cealla NK, agus cealla T, agus minicíocht 90% i neodrófail agus 80% i gcealla B.

Maidir le slonn coibhneasta RNA, i gcomparáid leis na minicíochtaí faoi seach, léirigh na bealaí TRP patrún slonn níos sainiúla cille, mar is léir trí chomparáid a dhéanamh idir na luachanna Δct faoi seach sna cineálacha cealla éagsúla a ndearnadh anailís orthu (Fíor 1B). Mar shampla, braitheadh ​​​​TRPP3 le minicíocht 100% i ngach cineál cille, ach léirigh sé go soiléir an leibhéal léirithe is airde i monocytes.

I gcodarsnacht leis sin, aimsíodh an cainéal TRPV2 i ngach ceann de na cineálacha cille a ndearnadh imscrúdú orthu, le leibhéal ard inchomparáide RNA-léiriú chomh maith le minicíocht ard. Ar an gcaoi chéanna, bhí leibhéil tras-scríbhinní TRPV1 comhchosúil i ngach cineál cille a scrúdaíodh (Fíor 1B).

2.2. Slonn Dromchla TRPV1 ar Neutrophils

Níl an t-eolas reatha faoi fheidhm TRPV1 i neodrófail dhaonna soiléir fós. Chun ról TRPV1 i neodrófail dhaonna a fhiosrú tuilleadh, rinneamar imscrúdú ar an gcéad dul síos an bhfuil an cainéal TRPV1 curtha in iúl ar dhromchla na neodrófilí daonna príomhúla ag baint úsáide as cíteiméadracht sreabhadh cille beo (Fíor 2).

Rinneadh na neodrófail scoite a dhaite le haghaidh CD15 mar mharcóir dromchla do neodrófail (Fíor 2A, B) agus ag an am céanna dhaite iad le hantasubstaint a ardaíodh i gcoinne eiteabó sa chéad lúb eischeallach den phróitéin TRPV1 (Fíor 2B) nó sa rialú isitíopa faoi seach, agus feidhmíonn an dara ceann mar ionadaí chun ceangal neamhshonrach a thomhas (Fíor 2A). Laistigh den daonra CD15+, rinneadh anailís ar dhéine an fhluaraiseachta do FITC. Mar thoradh ar dhathú na neodrófilí leis an antashubstaint TRPV1 tháinig comhartha fluaraiseachta soiléir i gcomparáid leis an rialú isitíopa, rud a dhearbhaigh léiriú dromchla TRPV1 i neodrófail dhaonna bunscoile (Fíor 2C). Le hanailís a dhéanamh ar neodrófail ó cheathrar deontóirí aonair, léiríodh slonn dromchla inchomparáide de TRPV1 (Fíor 2D).

2.3. [6]-Méadú de bharr Gingerol ar Ca Intracellular2+

Ós rud é go mbeidh sní isteach Ca2+ mar thoradh ar ghníomhachtú TRPV1 arna spreagadh ag ligand, [23] cinneadh intracellular Ca2+ tiúchain neodrófilí tríd an dath íogair Ca2+- Fura-2. Bunaithe ar ár dtorthaí roimhe seo,[9] roghnaíodh tiúchan 50 nM den ligand TRPV1 [6]-gingerol aitheanta agus am goir de 2 h. Léirigh na hanailísí gur tháinig méadú ar thiúchan Ca2+ intracellular de bharr gor na neodrófilí le 50 nM [6]-gingerol, a bhí ar an meán 18.4% ± 1.0% den luach uasta, mar a chinntear trí 1 μM den ionomycin ionophore a chur i bhfeidhm. Ba é an méadú a tharlódh de bharr DMSO ná 4.7% ± 1.2% (Fíor 3).

2.4. Tionchar [6]-Gingerol ar Slonn TRPV1

Ansin, bhí sé mar aidhm againn anailís a dhéanamh ar thionchar spreagadh TRPV1 ag [6] -gingerol ar abairt TRPV1 ag an leibhéal tras-scríbhinn trí q-RTPCR chomh maith le leibhéal próitéin dromchla trí staining cille beo. Chun na críche sin, goraíodh neodrófail dhaonna le 50 nM [6] - sinséir ar feadh 2 h agus rinneadh na leibhéil slonn faoi seach a chainníochtú.

Ní raibh tionchar ag an gor 2 h seo ar athscríbhinn TRPV1 ná ar leibhéil próitéine (Fíor 4), agus níor athraigh sé freisin, ach amháin i gcás IL6, IL17A, IL24, C5, agus GDF5, an abairt RNA de ghéinte coitianta cytokine agus chemokine a imscrúdaíodh (Fíor S1, Tábla S2, Faisnéis Tacaíochta).

2.5. Tionchar [6]-Gingerol ar Léiriú Marcóirí Dromchla Neutrophil

Gearr Pills Jinkui Shenqi ina bpíosaí, meáigh thart ar 2.0 g den sampla go cruinn agus aistrigh isteach i bhfleascán cónúil stoptha é. Cuir 25 mL de meatánól 70% leis, meáigh an mhais iomlán, agus déan eastóscadh ultrasonaic (300 W, 40 kHz) ar feadh 35 nóiméad. Tar éis fuaraithe go teocht an tseomra, athlánaigh an meáchan caillte le meatánól 70% agus croith go maith. Scag an tuaslagán trí membrane microporous 0.45 μm chun an tuaslagán tástála a fháil.

 

Rinneadh scanadh lán-tonnfhad (190–400 nm) chun an tonnfhad braite a roghnú. Cé go bhfuil uas-ionsú morroniside agus logánin ag 230–240 nm, tá an tonnfhad seo thíos le torann ard bunlíne. Cinntíonn an tonnfhad 254 nm freagra cobhsaí agus cur isteach íseal cúlra. Táirgeann paeonol, aigéad cinnamic, acteoside agus 7-hydroxycoumarin go léir ionsú cobhsaí ultraivialait ag 254 nm. Dá bhrí sin, roghnaíodh 254 nm mar an tonnfhad braite aontaithe le haghaidh anailíse sioncrónach il-chomhpháirte.

 

I measc na n-amhábhar luibhe nádúrtha go léir,Cistanche tubulosa (Cistanche Desertliving)sheasann amach mar an luibh leis anábhar acteoside is airdedomhanda. Mar chroí-gliocóisíd feanilethanoid, tá acteoside clúiteach as frith-athlasadh, frithocsaídeach, neuroprotection agus rialáil imdhíonachta. Déanann ár monarcha speisialtóireacht i sliocht Cistanche tubulosa ard-íonachta, ina bhfuil leibhéil i bhfad níos airde acteoside agus comhábhair ghníomhacha eile ná ábhair luibhe coitianta, rud a fhágann gur amhábhar idéalach é chun forlíontaí aiste bia préimhe, bianna feidhmiúla, deochanna luibhe agus táirgí cúram craicinn a fhorbairt do mhargaí Eorpacha agus Mheiriceá.

 

 

Soláthraíonn Acteoside, comhpháirt sínithe ár sliocht Cistanche tubulosa, tairbhí lárnacha iomadúla atá ag teacht le héilimh sláinte tomhaltóirí Eorpacha agus Mheiriceá: frith-athlasadh, feabhsú imdhíonachta, frith-hypoxia, scavenging radacach saor in aisce, deisiú DNA agus cosaint ae. In éineacht le echinacoside (frithocsaídeach, neuroprotection, cosaint cardashoithíoch) agus polaisiúicrídí (rialachán imdhíonachta), comhtháthaíonn ár sliocht na héifeachtúlachtaí príomhshrutha go léir a bhaineann le comhábhair luibhe préimhe a luaitear thuas, lena n-áirítearfrith-athlastach, antibacterial, antioxidant, rialáil imdhíonachta agus cosaint cardashoithíoch.