Sainaithint Speiceas agus Anailís ar Chomhdhéanamh Ceimiceach ar Phlandaí Cistanche Fiáine ón gCéinia

Coimriú:Bhain an staidéar seo úsáid as moirfeolaíocht plandaí, histeolaíocht, agus teicnící barrachódaithe DNA chun speicis fhiáine Cistanche sa Chéinia a aithint. Socraíodh ábhar na bpríomhchodanna gníomhacha, lena n-áirítear gliocóisídí feinileatánóideach, alcóil siúcra, agus betaine, sa Cistanche fiáin ón gCéinia ag modh HPLC. Idir an dá linn, rinneadh an anailís méarloirg. Léirigh na torthaí gur aithníodh an gléasra Cistanche fiáin a bailíodh ón gCéinia mar Cistanche senegalensis (Reut.) Beck. An t-ábhar comhábhair ghníomhacha ar nósechinacoside,cistanoside A, aicteóis, isoacteoside, agus 2′-aicéitileacteoside i C. senegalensis ón gCéinia níos ísle ná iad siúd sa C. tubulosa intíre, ach níos airde ná iad siúd sa C. deserticola baile. Bhí ábhar betaine cosúil leis an ábhar sa C. deserticola baile, ach níl glúcós ann. Tá tréithe na méarloirg níos cosúla le tréithe C. tubulosa baile. Soláthraíonn an staidéar seo bonn do chosaint acmhainní, do thaighde domhain agus d'fhorbairt acmhainn Cistanche sa Chéinia.

Keywords: Cistanches Herba; Cistanche senegalensis (Reut.) Beck; An Chéinia; sainaithint speiceas; barrachódú DNA; cinneadh ábhar

 

 

 

Cistanche deserticolaYC Ma

 

Cistanche, luibh luachmhar i Leigheas Sínis Traidisiúnta, tagairt do na gais triomaithe, gile, súiteacha de phlandaí fásaigh marCistanche deserticolaYC MaagusCistanche tubulosa(Schenk) Wight, an dá bhall den teaghlach Orobanchaceae. Tá cáil air as a chumas tonify duáin yang, cothaigh bunúsach agus fola, agus an intestines a thaisiú chun constipation a mhaolú, tá Cistanche á cheiliúradh i dtéacsanna luibhe na Síne leis na céadta bliain. Tá a thaifead íocshláinte is luaithe le feiceáil sa chlasaic ársaClasaiceach Shennong de Materia Medica, áit a bhfuil Cistanche rangaithe mar luibh "grád níos fearr". Le linn na staire, tá go leor téacsanna leighis traidisiúnta doiciméadaithe na buntáistí cumhachtacha a bhaineann le Cistanche, ag tuilleamh an leasainm esteemed "Ginseng an Desert."

Cuirtear éifeachtaí cógaseolaíochta éagsúla Cistanche i leith a raon de chomhdhúile bithghníomhacha. Ina measc, is iad gliocóisídí feinileatánóideach na príomh-chomhábhair ghníomhacha atá freagrach as éifeachtaí tonúcháin duáin agus cothúcháin Cistanche. Léiríonn na comhdhúile seo-cosúil le echinacoside agus acteoside-ghníomhaíochtaí neuroprotective, frith-néaltrú, frith-aging, agus hepatoprotective. Go háirithe, is iad echinacoside agus acteoside an dá chomhdhúile tagarmhairc a úsáidtear le haghaidh rialú cáilíochta Cistanche mar atá sonraithe in eagrán 2020 de Pharmacopoeia na Síne. Ina theannta sin, tá éifeacht purgóideach bheith mar thoradh ar Cistanche go príomha mar gheall ar a chomhpháirteanna alcóil oligosaccharide, lena n-áirítear betaine, mannitol, fruchtós, glúcóis, agus siúcrós. Aithnítear go forleathan na cúig chomhpháirt seo mar tháscairí ar chumas Cistanche an intestines a thaisiú agus gluaiseacht bputóg a chur chun cinn.

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight

Sa tSín, cuimsíonn speicis mhóra CistancheCistanche deserticolaYC Ma,Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight,salsa ciste(CA Mey.) G., agusSinensis cisteG. Beck. Tá na speicis seo dúchasach do réigiúin mar Lár Mhongóil, Ningxia, Gansu, agus Xinjiang. Taobh amuigh de iarthuaisceart na Síne, tá speicis Cistanche scaipthe freisin thar réigiúin éireacha agus fhásacha na hEoráise agus i dtuaisceart agus in oirthear na hAfraice, lena n-áirítear tíortha mar an Iaráin, an Afganastáin, an Chéinia, an Phacastáin agus an Mhongóil.

Tá an Chéinia, atá suite in Oirthear na hAfraice agus trasna ar an meánchiorcal, comhdhéanta den chuid is mó d'ardchríocha le meánairde 1,500 méadar, ach is fásach nó leathfhásach a limistéir thuaidh. Tá stair fhada ag pobail dhúchasacha na Céinia ag baint úsáide as plandaí míochaineacha le haghaidh leighis. Tá saibhreas flóra míochaine sa réigiún - mar shampla, sleachta as coirt agus fréamhacha an chrainn scuab fiacla (Salvadora persicaL.) aitheanta as a n-airíonna frith-athlastacha agus antibacterial agus is minic a úsáidtear iad chun toothaches agus ionfhabhtuithe a chóireáil. Coirt an chrainn sandalwood (Osyris lanceolataHochst. & Steud.) a úsáidtear chun buinneach a chóireáil, agus decoctions de Maasai nettle (Urtica massaicaMildbr.) duilleoga a úsáidtear le haghaidh pian boilg. Tá an traidisiún saibhir seo tar éis cultúr beoga plandaí míochaine a chothú, ach mar gheall ar dhúshláin forbartha eacnamaíocha, níl úsáid na bplandaí míochaine seo doiciméadaithe go hiomlán ná staidéar córasach.

Is díol spéise é gur minic a bhreathnaítear ar speicis Cistanche mar fiailí san Afraic agus ní bhfuair siad mórán airde nó taighde. Go deimhin, níl beagnach aon staidéar foilsithe ar an gCistanche Afracach. Ag freagairt do chuireadh ón Roinn Forbartha Réigiúnaí do Thailte Arid agus Leath-Arid de Chomhphobal Oirthear na hAfraice, rinne ár bhfoireann taighde staidéar allamuigh sa Chéinia chun imscrúdú a dhéanamh ar acmhainní Cistanche áitiúla. Bhailíomar eiseamail fhiáine Cistanche, rinneamar sainaithint luibheolaíoch, agus rinneamar anailís ar a bpríomh-chomhdhúile bithghníomhacha. Ba é an aidhm ná éagsúlacht speiceas agus poitéinseal forbartha na Cistanche sa Chéinia a thuiscint, agus bonn eolaíoch a sholáthar le haghaidh tuilleadh taighde agus úsáid na bplandaí luachmhara fásaigh seo.

Cistanche tubulosa triomaithe fréimhe iomlán Díol sa tSín

Whatsapp Linn Le Tuilleadh Sonraí

 

 

Ábhair agus Modhanna

Ábhair Plandaí

Bhailigh na hOllúna Pengfei Tu agus Yong Jiang ó Scoil na nEolaíochtaí Cógaisíochta, Ollscoil Peking, i Kajiado, an Chéinia eiseamail Wild Cistanche ón gCéinia i mí Lúnasa 2023 (01 céim 50'01"S; 36 céim 47'00"E). Bailíodh dhá phlanda Cistanche fiáin agus lipéadaíodh K1 agus K2 orthu, mar aon le fréamhacha a bplanda ósta (féach Fíor 1). D'aithin Kennedy Matheka, cúntóir taighde ag Luibhlann Oirthear na hAfraice, Iarsmalanna Náisiúnta na Céinia, an gléasra ósta marSericocomopsis hildebrandtiiSchinz, a bhaineann leis an teaghlach Amaranthaceae. Samplaí deCistanche deserticolaagusCistanche tubulosaBailíodh ó Chathair Turpan agus ó Chontae Yutian i Réigiún Uathrialach Xinjiang Uygur iad, faoi seach, agus dheimhnigh an tOllamh Pengfei Tu iad mar ghaisí úra succulentacha deCistanche deserticolaYC Ma agusCistanche tubulosa(Shrenk) Wight. Coinnítear gach eiseamal dearbhán inár saotharlann.

Ionstraimí

Córas Uiscí Arc HPLC

Iarmhéid leictreonach Quintix125D-1CN (Sartorius, Beijing)

Micreascóp optúil BX-50 Olympus (Olympus, an tSeapáin)

Scanóir sleamhnáin lánléargais NanoZoomer-SQ (Hamamatsu Photonics, an tSeapáin)

Glantóir ultrasonaic digiteach KQ500DE (Kunshan Ultrasonach Instruments, an tSín)

grinder eastóscadh DNA MM400 (Retsch, an Ghearmáin)

Rothar teirmeach PCR (Analytik Jena, an Ghearmáin)

DYY-8C gaireas agus umar leictreafóiréis (Liuyi Instrument Factory, Beijing)

Córas íomháithe glóthach MINI Space 1000 (Tanon, Shanghai)

gorlann teocht tairiseach (Yiheng, Shanghai)

Imoibrithe

Ceannaíodh Echinacoside (go leor: DST191008-038), acteoside (DSTDL006101), isoacteoside (DST210601-060), D-mannitol (DSTDG006201) ó Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd; Fuarthas tubuloside A (MUST-15040115), 2'-acetylacteoside (MUST-15071504), betaine (MUST-23082505), D-glúcóis ainhidriúil (MUST-23030214), fruchtós (MUST-23031403), agus siúcrós (MUST-23082505) ó Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd. Bhí OCEANPAK), aigéad formach (grád HPLC, Imoibrithe VOKA) íonachta crómatagrafaíochta ar fad. Baineadh úsáid as trealamh eastósctha DNA genomic plandaí (DP305, Tiangen Biotech, an tSín) agus uisce ultrapure le haghaidh anailíse móilíneach.

Ullmhú, Staining, agus Breathnú Rannóga Gas Succulent

Tar éis an mhodha tagartha [10], gearradh gais súiteacha úra Cistanche go méideanna oiriúnacha agus caomhnaíodh iad i ndéadaitheoir FAA (eatánól 70%: aigéad aicéiteach oighreach: formaildéad=90:5:5). Tar éis níocháin le huisce reatha chun an fostóir iarmharach a bhaint, rinneadh na fíocháin a mhaolú le haigéad hidreafluarach, a dhaite le Safranin, díhiodráitithe, leabaithe i pairifín, agus altáilte. Tar éis gléasta, bácáladh na sleamhnáin, leáigh pairifín, agus rinneadh na hailt a dhaite le tuaslagán Fast Green eatánól 95%, agus ansin séalaithe le roisín neodrach. Breathnaíodh moirfeolaíocht an fhíocháin faoi mhicreascóp, agus rinneadh scanadh ar ailt dea-chruthaithe ag baint úsáide as scanóir panoramic chun íomhánna ardtaifigh a fháil.

Eastóscadh DNA, Aimpliú PCR, agus Seicheamhú

Baineadh DNA iomlán ó shamplaí Cistanche agus fréamhacha plandaí óstaigh ag baint úsáide as trealamh eastósctha DNA géanóm plandaí (Tiangen), de réir phrótacal an déantóra. Rinneadh tiúchain DNA agus cóimheasa OD260/OD280 a thomhas le speictreafótaiméadar UV micrea-toirte chun cáilíocht a mheas sula leantar ar aghaidh.

Dhírigh aimpliú PCR ar an réigiún spacer tras-scríofa inmheánach 2 (ITS2) de DNA ribosomal agus an ghéine chloroplast psbA-trnH le haghaidh aitheantais mhóilíneach [11]. Seo a leanas na sraitheanna primer:

ITS2 ar aghaidh: 5'-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3'

Droim ar ais ITS2: 5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'

psbA-trnH ar aghaidh: 5'-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3'

droim ar ais psbA-trnH: 5'-CGCGCATGGGTGGATTCACAATCC-3'

Áiríodh ar imoibrithe PCR (25 μL) 12.5 μL 2 × Taq Master Mix, 1 μL gach ceann de na primers tosaigh agus droim ar ais (2.5 μmol·L⁻¹), teimpléad DNA 2 μL, agus 8.5 μL ddH₂O. Aimpliú ITS2: 94 céim 5 min; ansin 35-40 timthriallta 94 céim 30 s, 56 céim 30 s, 72 céim 45 s; síneadh deiridh ag 72 céim 10 min. aimpliú psbA-trnH: 95 céim 4 min; 35 timthriall de 94 céim 30 s, 55 céim 1 min, 72 céim 1 min; síneadh deiridh ag 72 céim 10 min. Rinneadh anailís ar tháirgí PCR trí leictreafóiréis glóthach, agus cuireadh na spriocbhannaí faoi réir seicheamhú déthreoch Sanger. Rinneadh anailís ar chrómatagraim seichimh ag baint úsáide as CodonCode Aligner (v3.7.1, CodonCode Co., USA) chun seichimh DNA sprice a fháil, a aithníodh ag baint úsáide as córas barrachód DNA Materia Medica na Síne agus anailís BLAST i mbunachar sonraí GenBank. Tógadh crainn phylogenetic le bogearraí MEGA X chun speicis a shainaithint.

Cinneadh Cainníochtúil ar Chúig Ghlicóisídí Feinileatánóideach

Socraíodh ábhar cúig glycosídí feinileatánóideach tar éis modhanna a bunaíodh roimhe seo [13]. Réitigh tagartha a ullmhú: meáigh go cruinn echinacoside, tubuloside A, acteoside, isoacteoside, agus 2'-acetylacteoside, agus a dhíscaoileadh i meatánól 50% chun réiteach caighdeánach measctha de thiúchan réamhshocraithe a ullmhú. Coinníollacha crómatagrafacha: colún Phenomenex Luna C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm); pas soghluaiste A: aicéataitrile-meatánól (6:1, v:v); céim soghluaiste B: maolán aigéad formach 0.1%; elution grádán: 0–5 min, 10%–18% A; 5–15 nóim, 18%–24% A; 15–20 nóim, 24%–26% A; 20–28 nóim, 26%–30% A; 28–35 nóim, 30%–35% A. Ráta sreafa: 1.0 mL·min⁻¹; teocht colún: 30 céim; tonnfhad braite: 330 nm. Modh: instealladh 10 μL gach ceann de na réitigh chaighdeánacha agus samplacha isteach sa HPLC le haghaidh anailíse.

Cinneadh Cainníochtúil Betaine, Mannitol, Fruchtós, Glúcós agus Siúcrós

Rinneadh na comhpháirteanna seo a chainníochtú de réir modhanna roimhe seo [14]. Réitigh thagartha: meáigh betaine, mannitol, fruchtós, glúcós agus siúcrós go cruinn, tuaslagtha in uisce chun tuaslagán caighdeánach measctha a ullmhú. Réitigh shamplacha: caolaigh réiteach samplach Cistanche (ullmhaithe mar atá thuas) le meatánól 50% go 1/5 tiúchan bunaidh, meascadh go maith, agus scagaire trí membrane microporous 0.22 μm. Coinníollacha crómatagrafacha: Shodex ASHAIPAK NH2P-50 4colún E (250 mm × 4.6 mm, 5 μm); céim shoghluaiste: aicéataitrile-uisce (77:23); ráta sreafa: 0.7 mL·min⁻¹; teocht colún: 25 céim; bhrath le brathadóir galaithe scaipthe solais (ELSD): teocht feadáin sruth 100 céim , sreabhadh gáis iompróra 3 L·nóim⁻¹. Rinneadh cainníochtú trí 5 μL agus 10 μL de réitigh chaighdeánacha agus 5 μL de thuaslagán samplach a instealladh, agus an t-ábhar a ríomh ag baint úsáide as an chothromóid logartamach caighdeánach seachtrach dhá phointe.

Meastóireacht Cosúlachta Méarloirg

Ullmhaíodh réitigh shamplacha mar a thuairiscítear thuas, agus bhí coinníollacha agus modhanna HPLC mar an gcéanna le haghaidh cainníochtú glycosíde feinileatánóideach. Iompórtáladh sonraí crómatagrafacha isteach sa "Córas Measúnaithe Cosúlachta Méarlorg Méarloirg Chrómatagrafach Leigheas na Síne Traidisiúnta (Eagrán 2012)". Baineadh úsáid as crómatagram sampla K1 mar thagairt, le cúig bhuaic glycosíde feanilethanoid marcáilte le haghaidh ceartú ilphointí, ag giniúint forleagan agus crómatagram tagartha, agus cosúlacht méarloirg á ríomh.

 

 

Torthaí agus Anailís

1. Aitheantas moirfeolaíoch na Cistéise

Léiríonn na heiseamail fhiáine Cistanche a bailíodh sa Chéinia tréithe moirfeolaíocha sainiúla. Is spíc é an inflorescence, le bract amháin atá fada-ovate-lanceolate i gcruth, agus dhá bracteoles beag, a bhfuil an dá thaobh de glabrous. Tá an calyx feadánach, le cúig lob maol ag an APEX. Tá an corolla feadánacha-campanulate, a thomhas 3-4 cm ar fad, thart ar 2.5 uair fad an calyx, le cúig lobes ag an APEX agus corrlaigh athchuartha. Tá dath buí ar an corolla (Fíor 1A, B), ag casadh donn nuair a bhíonn sé triomaithe. Tá na filiméid thart ar 3 cm ar fad, le cúpla ribí mín ag an mbun. Tá an stíl beagán níos faide ná na stamens, agus tá an stiogma beagnach sféarúil, réidh agus glabrous. Tá ceithre stamens, le anthers ubhagán fada atá clúdaithe go dlúth le ribí fada olla; cuirtear bonn an anther in iúl go tobann. Tá an ghné seo comhsheasmhach leis na tuairiscí arCistanche deserticolaagussalsa cistei "Flóra na Síne"; i gcodarsnacht leis sin, an bonn anther deCistanche tubulosais maol agus cruinn, a dhéanann idirdhealú soiléir idir é agus speicis eile sa ghéineas céanna [7].

Ina theannta sin, an gléasra óstach,Sericocomopsis hildebrandtiiIs tor lán-brainseach é Schinz. Tá a chuid brainsí óga clúdaithe go dlúth le ribí olla buí nó bán. Tá na duilleoga leathan spatulate-obovate le bonn caol (Fíor 1D, E). Tá na inflorescences cnuasaithe go dlúth ar feadh an peduncle, atá, in éineacht leis an ais inflorescence, clúdaithe le ribí olann liath-bán nó pale liath nó bán.

Tá gas succulent an Cistanche fiáin leacaithe-sorcóireach, le dromchla pale buí nó donn clúdaithe go dlúth le snáthaid-mhaith scálaí méithe eagraithe i sraitheanna. Tá an uigeacht daingean, ach beagán solúbtha (Fíor 2A). Tá trasghearradh an ghas succulent buí nó donn-dhonn, agus cuachtaí soithíoch scaipthe donn éadrom le feiceáil don tsúil nocht (Fíor 2B). Faoin micreascóp, is cosúil go bhfuil na babhtaí soithíoch ovoid nó fusiform, comhdhéanta de xiléim agus phloem, go minic i láthair mar bheartáin scaipthe solitary nó grúpáilte i mbeirteanna nó tríreanna, le phloem dírithe i dtreonna éagsúla (Fíor 2C, D). De réir eagrán 2025 den Pharmacopoeia Síneach, tá tras-alt deCistanche deserticoladonn-donn, le cuachtaí soithíoch atá cosúil le poncanna donn éadroma agus iad eagraithe i bhfáinne tonnach, agus is minic a bhíonn sé ina bheart cuach fillte istigh; i gcodarsnacht leis sin,Cistanche tubulosataispeántais scaipthe babhtaí soithíoch cosúil le ponc, príomhghné idirdhealaitheach chun an dá chineál slices Cistanche seo a aithint [1]. Taispeánann an Cistanche fiáin ón gCéinia freisin cuachtaí soithíoch scaipthe cosúil le poncanna sa trasghearradh, ag teacht le tréithe naCistanche tubulosa.

 

 

Fíor 2 Dealramh agus tréithe trasghearrtha de phlanda Cistanche fiáin (K2) sa Chéinia. A: Cuma an gas; B: An trasghearradh den ghas méithe; C: Alt pairifín den gas méithe (staining glas safranin-tapa); D: Radharc méadaithe ar an bundle soithíoch sa chuid paraifín